蘋果酸脫氫酶（MDH）測定試劑盒

（測血清、血漿 紫外法）

二、操作步驟：

a、將紫外分光光度計于 340nm 處,0.5cm 光徑石英比色皿,以雙蒸水調零 (石英比色皿準備兩只,一只用于調零,一只用于測定)。

b、將工作液，37℃預溫 3 分鐘以上。

c、往相應編號的試管中加入 100μl 待測樣本，取 1ml 工作液迅速沖入試管中，立即混勻并計時。(空白管取 100μl 雙蒸水,加入 1ml 工作液,其它操作與測定相同)

d、迅速倒入石英比色皿中在紫外分光光度計 340nm 處比色，20 秒時讀取吸光度值（A1值）,在 1 分 20 秒時再次測定吸光度值（A2值）；

e、求出 2 次吸光度差值（△A=A1-A2）。

[注]：空白管只須做 1～2 只 (空白 OD 很穩定)

若△A 測定/分＜0.05 則需加大樣本的濃度；否則影響檢測結果。

若△A 測定/分＞0.3，則需將樣本的濃度稀釋后再測；否則影響檢測結果。

請在批量檢測前一定要取正常對照組樣本做此樣本濃度的預試

四、測定原理：

蘋果酸脫氫酶（Malate Dehydrogenase, MDH）催化的氧化還原反應伴隨著 340nm 處吸光度的降低，通過測定每分鐘吸光度的變化來計算蘋果酸脫氫酶的活力。

五、測定意義：

MDH 與植物代謝的多條重要途徑有密切關系，它在運轉物質和能量的 Mal/OAA（蘋果酸/草酰乙酸）和 Mal/Asp（蘋果酸/天冬氨酸）穿梭中起重要作用；在光呼吸中，MDH 為 Gly（甘-氨酸）氧化提供 NAD +；在線粒體中，MDH還是決定 TCA(三羧酸循環)運轉速度的調節酶之一；在細胞溶質中，MDH 與丙酮酸支路相聯系。所以 MDH 系統不僅是研究酶區域化和酶調節的好系統，也為研究各細胞器之間的聯系和許多發育問題提供了方便。

根據近幾年文獻報道，該酶不僅與植物病理有關，還與抗凍，抗鹽有關。MDH 與抗熱的關系僅見于對嗜熱菌的報道。

蘋果酸脫氫酶可用于繼發性肝癌早期診斷與鑒別和心肌病早期診斷繼發性肝癌時 MDH1、MDH2、MDH3活性均增強。

AMI 時 12～24 小時，MDH3酶帶活性增強。也表明心肌細胞線粒體損傷

①、MDH 總活性升高和 MDH3增強：病毒性肝炎初期和病情極變期。幅度與病情的嚴重性相關，發病初期測定 MDH3意義更大。

②、MDH1和 MDH2增強：急性肝炎、肝細胞壞死。

③、MDH1、MDH2、MDH3活性均增強：肝臟腫瘤。有的腫瘤病人出現 MDH4酶帶。

④、MDH3增強：急性心肌梗塞的陽性率為 91%，峰值出現時間約在 12～24 小時，是反應心肌梗塞嚴重性的有效指標。

附錄Ⅰ:小鼠血清酶反應曲線

1、樣本來源：取小鼠新鮮全血，肝素抗凝，然后置于低速離心機中，以 1000 轉/分,離心 10 分鐘，然后分離血漿，待測。

2、操作表：

a、將紫外分光光度計于 340nm 處,0.5cm 光徑石英比色皿,以雙蒸水調零 (石英比色皿準備兩只,一只用于調零,一只用于測定)。

b、將工作液，37℃預溫 3 分鐘以上。

c、往相應編號的試管中加入 100μl 待測樣本，取 1ml 工作液迅速沖入試管中，立即混勻并計時。(空白管取 100μl 雙蒸水,加入 1ml 工作液,其它操作與測定相同)

d、迅速倒入石英比色皿中在紫外分光光度計 340nm 處比色，20 秒時讀取吸光度值（A1值）,在 1 分 20 秒時再次測定吸光度值（A2值）；

e、求出 2 次吸光度差值（△A=A1-A2）。

 蘋果酸脫氫酶（MDH）測定試劑盒