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高密度脂蛋白膽-固醇測試盒( 直接法) 生化試劑

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高密度脂蛋白膽-固醇測試盒( 直接法),準確稱取組織重量,按重量(g):體積(mL)=1:9 的比例,加入 9 倍體積的勻漿介質,冰水浴條件下機械勻漿,2500 轉/分,離心 10 分鐘,取上清液待測。

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高密度脂蛋白膽-固醇測試盒( 直接法)

 直接法 分光光度計法)

一、操作過程:

1、樣本處理:

①、血清(漿)直接測定,如超過線性范圍用生理鹽水稀

釋后測定。

②、培養液樣本:吸取培養液,1000 /分,離心 10 分鐘,

取上清測定。[]:一般建議細胞密度在 100 萬個/mL

以上。

③、組織樣本:準確稱取組織重量,按重量(g):體積(mL)=1

9 的比例,加入 9 倍體積的勻漿介質,冰水浴條件下

機械勻漿,2500 /分,離心 10 分鐘,取上清液待測。

[]:如組織樣本為非高脂樣本,勻漿介質統一用磷酸

鹽緩沖液(0.1mol/L pH 7.4)或生理鹽水進行提取;如組

織樣本為高脂樣本或部分為高脂樣本,勻漿介質可統

一用無水乙醇進行提取。

④、細胞樣本:

A、細胞收集:將制備好的細胞懸液取出,1000 /分,

離心 10 分鐘,棄上清液,留細胞沉淀;用等滲緩

沖液(推薦 0.1mol/L pH77.4 磷酸鹽緩沖液)

清洗 12 次,同樣 1000 /分,離心 10 分鐘,棄

上清液,留細胞沉淀;

B、細胞破碎:加入 0.20.3mL 的勻漿介質(推薦

0.1mol/LpH77.4 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水)

進行勻漿,冰水浴條件下超聲破碎(功率:300W,3

5 /次,間隔 30 秒,重復 35 )或手動勻漿,

制備好的勻漿液不離心待測。也可采用裂解液裂解

(推薦 TritonX-10012%,裂解 3040 分鐘)

裂解好的液體不離心直接測定。[]:建議細胞密

度在 100 萬個/mL 以上。破碎好的液體可顯微鏡觀

察細胞是否破碎

五、性能指標:

1試劑空白管吸光度≤0.10

2、線性范圍:05.16mmol/Lr 20.990

3、靈敏度:測試 1.00mmol/L 被測物時,吸光度值A 大于

0.04

4、準確度:相對偏差≤10%

5、精密度:CV≤3%,批間相對極差≤5%

6、穩定性:原包裝試劑盒在 2℃8℃避光保存,有效期為

12 個月。開啟后 2℃8℃避光保存,可穩定一

個月。

六、注意事項:

1、本產品僅用于科研,不得用于臨床診斷,切勿服用。

2、樣品含量如超出檢測范圍,可用生理鹽水稀釋樣

本后進行測定,測定結果乘以稀釋倍數。

3、試劑防止葡萄糖、膽-固醇等試劑的污染。

4試劑與樣本量可按照儀器要求,按比例增減。

5樣本中 HDL-C 含量較低時,可以加大樣本取樣量(如取

10μL 20μL,同時標準品需要稀釋相應的倍數后和樣

本取樣量一致)后測定。

6標準品粉劑為凍干粉,溶解時間較長,配置時可提前半

小時配制。

七、參考文獻:

1Nader Rifai,Thomas G.Cole,Elizabeth lannotti.

Clin.Chem.JuL 1998;44:1452-1458.

2 Y Okamoto, S Tanaka,H Nakano.Clin.Chem. Dec

1995;41:1784.

八、參考值:

大鼠血漿:0.45±0.16mmol/L

小鼠血漿:0.92±0.11 mmol/L

雞血漿:0.36±0.12(某些種類的能達到 2.33±0.38mmol/L

魚血漿:0.99±0.22 mmol/L

小鼠肝臟:12.4±2.0 μmol/gprot

魚肝臟:39.36±12.37μmol/gprot

注:以上值僅供參考,并無臨床學意義。

高密度脂蛋白膽-固醇測試盒( 直接法) 

 

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