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超微量 Ca 2+–ATP 酶測試盒 生化試劑

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超微量 Ca 2+–ATP 酶測試盒,制備好的細胞懸液不需要離心,同時用考馬斯亮藍試劑測定組織蛋白(試劑本所有售)。

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超微量 Ca 2+–ATP 酶測試盒

(測組織、培養細胞)

一、試劑組成與配制:(試劑盒有效期 6 個月)

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二、樣本的前處理:

1、組織的前處理:(組織勻漿上清液制備參考實驗方法學)

準確稱取組織重量,按重量(g):體積(mL)=1:9

的比例,加入 9 倍體積的生理鹽水,冰水浴條件下機

械勻漿,2500 /分,離心 10 分鐘,取上清液(即 10%

的勻漿上清液),再用生理鹽水 10 倍稀釋成 1%,同時

用考馬斯亮藍試劑測定組織蛋白(試劑本所有售)。如

果預試結果太高,再將 1%的組織勻漿稀釋成不同濃度

再進行預試后再決定取樣濃度

2、培養細胞的前處理:將培養細胞消化,離心,棄上清,

留下層細胞,每管加 0.20.3mL 生理鹽水或勻漿介質

制備成 10 7 /cm3細胞懸液,即 10 7 /mL,再進行破碎。破

碎細胞方法有三種:①、用勻漿器勻漿。②、用超聲粉

碎器粉碎。③、反復凍溶 3 (第③種方法有時會影響

酶活力)。制備好的細胞懸液不需要離心,同時用考馬

斯亮藍試劑測定組織蛋白(試劑本所有售)。再將細胞

勻漿液稀釋成不同濃度進行預試,根據預試結果決定取

樣濃度。

[ 1]:在測試加樣前要搖勻后取樣。

[ 2]:不可用磷酸鹽緩沖液或含磷的試劑作為樣本勻

漿或稀釋樣本。

[ 3]:預試結果將絕對吸光度值(測定管吸光度值

對照管吸光度值)控制在 0.2 左右為宜。

五、測定意義:

ATP 酶存在于組織細胞及細胞器的膜上,是生物膜

上的一種蛋白酶,它在物質運送、能量轉換以及信息傳

遞方面具有重要的作用,機體在缺氧及一些疾病狀態下,

此酶活力發生一系列改變,另外有些遺傳疾病也與此酶

活力有關。

六、測定原理:

ATP 酶可分解 ATP 生成 ADP 及無機磷,測定無機

磷的量可判斷 ATP 酶活力的高低。

 超微量 Ca 2+–ATP 酶測試盒

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