羥自由基(OH.-)測(cè)定試劑盒

（比色法）

一、測(cè)定原理：

Fenton 反應(yīng)是最常見(jiàn)的產(chǎn)生羥自由基的化學(xué)反應(yīng)，

H2O2 的量和 Fenton 反應(yīng)產(chǎn)生的 OH·量成正比，當(dāng)給予電子

受體后，用griess試劑顯色，形成紅色物質(zhì)，其呈色與OH·的

多少成正比關(guān)系。

二、試劑組成與配制：(50 管/48 樣)

試劑一：3%H2O2標(biāo)準(zhǔn)品貯備液 0.5mL×1 支，4℃保存 3 個(gè)

月。0.03％標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液的配制：3%H2O2 標(biāo)準(zhǔn)貯

備液∶雙蒸水＝1∶99 稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配。

試劑二：底物貯備液 1mL×1 支，4℃保存 3 個(gè)月。

底物應(yīng)用液的配制：

①、若您的樣本為抑制羥自由基，即測(cè)定管吸光度比

對(duì)照管吸光度低，則底物應(yīng)用液的配制：底物

貯備液∶雙蒸水＝1∶99 稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配。

②、若您的樣本為產(chǎn)生羥自由基，即測(cè)定管吸光度比

對(duì)照管吸光度高，則底物應(yīng)用液的配制：底物貯

備液∶雙蒸水＝1∶299 稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配。

試劑三：甲液貯備液 2mL×1 支，4℃保存 3 個(gè)月，用時(shí)加

雙蒸水 1∶9 稀釋成應(yīng)用液。乙液 7mL×2 支，4℃

保存 3 個(gè)月。試劑三應(yīng)用液的配制：甲液應(yīng)用液

與乙液等比例混合，用多少配多少，余下 4℃保

存。

試劑四：液體 10mL×1 瓶，4℃保存 3 個(gè)月。用時(shí)加雙蒸

水稀釋至 100mL，制備成應(yīng)．用．液．，4℃保存。若

有結(jié)晶，則放置 37℃水浴至全部溶解后再稀釋。

試劑五：液體 30mL×1 瓶，避光 4℃冰箱保存 3 個(gè)月。

試劑六：液體 30mL×1 瓶，避光 4℃冰箱保存 3 個(gè)月。

試劑七：分析純的冰乙酸（冰醋酸）自備。

顯色劑的配制：試．劑．四．應(yīng)．用．液．∶試劑五∶試劑六∶冰乙酸

＝8∶3∶3∶2，現(xiàn)用現(xiàn)配。

[注]：抑制羥自由基的物質(zhì)如：血清（漿）、各種組織勻漿液、

口服液等；產(chǎn)生羥自由基的物質(zhì)如：中性白細(xì)胞、某

些藥物、部分植物等。

五、注意點(diǎn)：

1、每一只管子反應(yīng)時(shí)間一分鐘（從加入試劑三到加入顯

色劑的時(shí)間）一定要準(zhǔn)確。

2、必須嚴(yán)格按照操作表順序加試劑，不可配制混合試劑。

3、檢測(cè)樣本溶劑或介質(zhì)可為生理鹽水、雙蒸水、醋酸，

但不能為磷酸緩沖液、無(wú)水乙醇。

4、此法檢測(cè)靈敏度較高，檢測(cè)血清（漿）和組織以外樣

本時(shí)，最好先取原液及不同濃度稀釋后的樣本,例如 5

倍稀釋液或 10 倍稀釋液做預(yù)試。如測(cè)定管顏色太淺可

將樣本用其溶劑繼續(xù)稀釋至顏色較深為止。我所曾檢

測(cè)花粉的水提液的羥自由基，將其原液稀釋 150 倍后，

顯色較好。

附錄Ⅰ：羥 自 由 基 最 佳 取 樣 濃 度 摸 索

一、樣本前處理：

1、血清（漿）：用生理鹽水將血清（漿）按 1︰1、1︰4、1

︰9、1︰19 等稀釋成一系列不同濃度的血清

（漿），分別取不同濃度的血清（漿）0.2mL 按血

清（漿）的測(cè)定操作表進(jìn)行檢測(cè)。

2、組織勻漿、細(xì)胞、線粒體或細(xì)胞膜等組織：分別用生理

鹽水將組織勻漿液稀釋成 10%、5%、2%、1%、

0.5%、0.1%等一系列不同濃度的組織勻漿，分別

取不同濃度的組織勻漿 0.2mL 按組織的測(cè)定操作

表進(jìn)行檢測(cè)。

二、操作步驟（以血漿樣本為例作取樣濃度摸索）：

1、樣本來(lái)源：正常組大鼠眼眶取全血，肝素抗凝取血漿進(jìn)

行測(cè)定。

2、樣本稀釋：用生理鹽水將血漿按 1︰1、1︰4、1︰9、1

︰19、1︰49、1︰99 稀釋成一系列不同濃度

的血漿，分別取不同濃度的血漿 0.2mL 按血

清（漿）的測(cè)定操作表進(jìn)行檢測(cè)。

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