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羥自由基(OH.-)測(cè)定試劑盒 生化試劑

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羥自由基(OH.-)測(cè)定試劑盒,F(xiàn)enton 反應(yīng)是最常見(jiàn)的產(chǎn)生羥自由基的化學(xué)反應(yīng),H2O2 的量和 Fenton 反應(yīng)產(chǎn)生的 OH·量成正比,當(dāng)給予電子受體后,用griess試劑顯色,形成紅色物質(zhì),其呈色與OH·的多少成正比關(guān)系。

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羥自由基(OH.-)測(cè)定試劑盒

(比色法)

一、測(cè)定原理:

Fenton 反應(yīng)是最常見(jiàn)的產(chǎn)生羥自由基的化學(xué)反應(yīng),

H2O2 的量和 Fenton 反應(yīng)產(chǎn)生的 OH·量成正比,當(dāng)給予電子

受體后,用griess試劑顯色,形成紅色物質(zhì),其呈色與OH·

多少成正比關(guān)系。

二、試劑組成與配制:(50 /48 )

試劑一:3%H2O2標(biāo)準(zhǔn)品貯備液 0.5mL×1 支,4℃保存 3 個(gè)

月。0.03%標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液的配制3%H2O2 標(biāo)準(zhǔn)貯

備液∶雙蒸水=199 稀釋,現(xiàn)用現(xiàn)配。

試劑二:底物貯備液 1mL×1 支,4℃保存 3 個(gè)月。

底物應(yīng)用液的配制:

①、若您的樣本為抑制羥自由基,即測(cè)定管吸光度比

對(duì)照管吸光度低,則底物應(yīng)用液的配制:底物

貯備液∶雙蒸水=199 稀釋,現(xiàn)用現(xiàn)配。

②、若您的樣本為產(chǎn)生羥自由基,即測(cè)定管吸光度比

對(duì)照管吸光度高,則底物應(yīng)用液的配制:底物貯

備液∶雙蒸水=1299 稀釋,現(xiàn)用現(xiàn)配。

試劑三:甲液貯備液 2mL×1 支,4℃保存 3 個(gè)月,用時(shí)加

雙蒸水 19 稀釋成應(yīng)用液。乙液 7mL×2 支,4℃

保存 3 個(gè)月。試劑三應(yīng)用液的配制:甲液應(yīng)用液

與乙液等比例混合,用多少配多少,余下 4℃

存。

試劑四:液體 10mL×1 瓶,4℃保存 3 個(gè)月。用時(shí)加雙蒸

水稀釋至 100mL,制備成應(yīng).用.液.,4℃保存。若

有結(jié)晶,則放置 37℃水浴至全部溶解后再稀釋。

試劑五:液體 30mL×1 瓶,避光 4℃冰箱保存 3 個(gè)月。

試劑六:液體 30mL×1 瓶,避光 4℃冰箱保存 3 個(gè)月。

試劑七:分析純的冰乙酸(冰醋酸)自備。

顯色劑的配制:試.劑.四.應(yīng).用.液.∶試劑五∶試劑六∶冰乙酸

8332,現(xiàn)用現(xiàn)配。

[]抑制羥自由基的物質(zhì)如:血清(漿)、各種組織勻漿液、

口服液等;產(chǎn)生羥自由基的物質(zhì)如:中性白細(xì)胞、某

些藥物、部分植物等。

五、注意點(diǎn):

1、每一只管子反應(yīng)時(shí)間一分鐘(從加入試劑三到加入顯

色劑的時(shí)間)一定要準(zhǔn)確。

2、必須嚴(yán)格按照操作表順序加試劑,不可配制混合試劑。

3、檢測(cè)樣本溶劑或介質(zhì)可為生理鹽水、雙蒸水、醋酸,

但不能為磷酸緩沖液、無(wú)水乙醇。

4、此法檢測(cè)靈敏度較高,檢測(cè)血清(漿)和組織以外樣

本時(shí),最好先取原液及不同濃度稀釋后的樣本,例如 5

倍稀釋液或 10 倍稀釋液做預(yù)試。如測(cè)定管顏色太淺可

將樣本用其溶劑繼續(xù)稀釋至顏色較深為止。我所曾檢

測(cè)花粉的水提液的羥自由基,將其原液稀釋 150 倍后,

顯色較好。

附錄:羥

一、樣本前處理:

1、血清(漿):用生理鹽水將血清(漿)按 11141

9、119 等稀釋成一系列不同濃度的血清

(漿),分別取不同濃度的血清(漿)0.2mL 按血

清(漿)的測(cè)定操作表進(jìn)行檢測(cè)。

2、組織勻漿、細(xì)胞、線粒體或細(xì)胞膜等組織:分別用生理

鹽水將組織勻漿液稀釋成 10%5%2%、1%、

0.5%、0.1%等一系列不同濃度的組織勻漿,分別

取不同濃度的組織勻漿 0.2mL 按組織的測(cè)定操作

表進(jìn)行檢測(cè)。

二、操作步驟(以血漿樣本為例作取樣濃度摸索):

1、樣本來(lái)源:正常組大鼠眼眶取全血,肝素抗凝取血漿進(jìn)

行測(cè)定。

2、樣本稀釋:用生理鹽水將血漿按 11、14、191

19149199 稀釋成一系列不同濃度

的血漿,分別取不同濃度的血漿 0.2mL 按血

清(漿)的測(cè)定操作表進(jìn)行檢測(cè)。

羥自由基(OH.-)測(cè)定試劑盒 

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