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超微量 Na +K+ Ca 2+Mg 2+ 總 ATP 酶測試盒 生化試劑

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超微量 Na +K+ Ca 2+Mg 2+ 總 ATP 酶測試盒,取肝素抗凝全血,1000轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,棄上層血清,留下層壓積紅細(xì)胞,取一定量的壓積紅細(xì)胞,加 49 倍的雙蒸水,例如取 5μl 的壓積紅細(xì)胞加入 245μl 雙蒸水中,混勻,使其充分溶血,對光觀察直至溶液透亮。

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超微量 Na +K+ Ca 2+Mg 2+ 總 ATP 酶測試盒

(測紅細(xì)胞)

一、試劑組成與配制:

11.png

 

二、紅細(xì)胞的前處理:

1、紅細(xì)胞計數(shù)(見附錄)或血紅蛋白測定(試劑本所有售)。

2、紅細(xì)胞溶血液的制備:

①、壓積紅細(xì)胞溶血液的制備取肝素抗凝全血,1000

轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,棄上層血清,留下層壓積紅細(xì)

胞,取一定量的壓積紅細(xì)胞,加 49 倍的雙蒸水,例

如取 5μl 的壓積紅細(xì)胞加入 245μl 雙蒸水中,混勻,

使其充分溶血,對光觀察直至溶液透亮。如果預(yù)試結(jié)

果太高,再將溶血液稀釋成不同濃度再進行預(yù)試后,

再決定取樣濃度。

②、全血紅細(xì)胞溶血液的制備:取小鼠全血,輕輕搖勻,

取一定量的全血按照 124 的體積比加 24 倍雙蒸水,

制成 25 倍稀釋的溶血液,例如取 5ul 的全血加雙蒸水

120ul 充分混勻,制成 25 倍稀釋的溶血液。對光觀察

直至溶液透亮。如果預(yù)試結(jié)果太高,再將溶血液稀釋

成不同濃度再進行預(yù)試后,再決定取樣濃度。

[ 1]:制備好的溶血液盡快進行檢測,否則易失活,因而必

須在所有的準(zhǔn)備工作做好以后再配制溶血液。

[ 2]:用不完的抗凝全血 4℃可保存 23 天, -20℃以下保

存一周或者更長時間。

[ 3]:不可用磷酸鹽緩沖液或含磷的試劑稀釋樣本。

[ 4]:預(yù)試結(jié)果將絕對吸光度值(測定管吸光度值對照管

吸光度值)控制在 0.2 左右為宜。


附錄Ⅰ:紅細(xì)胞計數(shù)法

紅細(xì)胞計數(shù)有以下三種方法,只需取其中一種即可以。

1、計數(shù)板直接紅細(xì)胞計數(shù):

①、紅細(xì)胞稀釋液的配制:檸檬酸三鈉 3.8 克,甲醛 1mL

雙蒸水 100mL,混勻,4℃保存。

②、 1 支試管,加入紅細(xì)胞稀釋液 2mL,取抗凝全血 10µL

加入試管稀釋液中,反復(fù)吹吸數(shù)次,再將試管顛倒數(shù)次

混勻。

③、取一滴稀釋血液灌入計數(shù)板。(應(yīng)一次灌滿,而且不要灌

得太多。)

④、用高倍鏡計數(shù)左上、左下、右上、右下,中央 5 個中方

格的紅細(xì)胞數(shù),將數(shù)得的數(shù)字×10 10,即為每升血中的紅

細(xì)胞數(shù)。

2、光電比濁法計紅細(xì)胞數(shù):

取試管 1 支,加入上述紅細(xì)胞稀釋液 4mL,再取 20µL

抗凝全血,加入 4mL 稀釋液中,反復(fù)吹吸數(shù)次,再將試管顛

倒數(shù)次混勻,立即倒入比色杯中,于 540nm1cm 光徑,雙

蒸水調(diào)零進行比色,記下吸光度值。以計數(shù)板計數(shù)的紅細(xì)胞

的數(shù)值為橫坐標(biāo),以相應(yīng)管的吸光度值為縱坐標(biāo),作標(biāo)準(zhǔn)曲

線。您可以不做曲線,用附錄Ⅱ參考標(biāo)準(zhǔn)曲線圖二(鼠紅細(xì)

胞數(shù)與比濁法吸光度換算曲線)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查出紅細(xì)胞

數(shù)。

3、用血紅蛋白(Hb)來換算紅細(xì)胞數(shù):

10µL 抗凝全血加入 2.5mL 血紅蛋白測試液(本所有

供應(yīng))中,混勻,靜置 10 分鐘,于 540nm1cm 光徑,雙

蒸水調(diào)零進行比色。將測得的吸光度乘以 367.7 即為血紅蛋

白的值。以計數(shù)板計數(shù)的紅細(xì)胞的數(shù)值為橫坐標(biāo),以相應(yīng)管

的血紅蛋白數(shù)為縱坐標(biāo),作標(biāo)準(zhǔn)曲線。您可以不做曲線,用

附錄Ⅱ的參考標(biāo)準(zhǔn)曲線圖一(鼠紅細(xì)胞數(shù)與血紅蛋白數(shù)的換

算曲線)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查出紅細(xì)胞數(shù)。

超微量 Na +K+ Ca 2+Mg 2+ 總 ATP 酶測試盒

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