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全血乳酸(Lactic Acid LD)測定試劑盒 生化試劑

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全血乳酸(Lactic Acid LD)測定試劑盒,以 NAD+為氫受體,LDH 催化乳酸脫氫產(chǎn)生丙酮酸,使NAD+轉(zhuǎn)化成 NADH。其中 PMS 遞氫使 NBT 還原為紫色呈色物,呈色物的吸光度在 530nm 時(shí)與乳酸含量成線性關(guān)系。

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全血乳酸(Lactic Acid LD)測定試劑盒

(測全血)

一、測定原理:

NAD+為氫受體,LDH 催化乳酸脫氫產(chǎn)生丙酮酸,使

NAD+轉(zhuǎn)化成 NADH。其中 PMS 遞氫使 NBT 還原為紫色呈

色物,呈色物的吸光度在 530nm 時(shí)與乳酸含量成線性關(guān)系。

二、試劑組成及配制(50 /48 樣):

蛋白沉淀劑:溶液 50mL×1 瓶,室溫保存 6 個(gè)月,如有結(jié)晶,

則取上清進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

試劑一:酶稀釋液 60mL×1 瓶,4℃8℃冰箱保存 6 個(gè)月。

試劑二:酶貯備液 0.6 mL×1 , 4℃8℃冰箱保存 6 個(gè)月;

用時(shí)用一次性吸頭進(jìn)行取樣。

酶工作液的配制:臨用前將試劑二(酶貯備液)和試劑一

(酶稀釋液)按照 1100 的體積比進(jìn)行混合,現(xiàn)

現(xiàn)配,4℃保存 24 小時(shí)內(nèi)有效;

試劑三:顯色溶液 6 mL×2 瓶, 4℃8℃避光冰箱保存 6

個(gè)月。

試劑四:粉劑×2 支,短期內(nèi)使用可放 4℃8℃冰箱,長

期(6 個(gè)月)存放請(qǐng)置-20℃以下。(:粉劑量較少,

可能附著于管壁或蓋子上,并非空管,如使用時(shí)肉眼

不可見,可將其 4000 轉(zhuǎn)/分鐘離心 2 分鐘后使用)

顯色劑的配制 1 瓶試劑三,轉(zhuǎn)移 1mL 進(jìn)入一支試劑四

粉劑中, 反復(fù)顛倒離心管混勻,待粉劑溶解后,再用

微量移液器將離心管中的液體轉(zhuǎn)移到瓶中,再從這

瓶試劑三中移出 1mL 到原試劑四離心管中,如此反

復(fù) 23 次,使二者充分混合溶解,配成顯色劑,

2℃8℃避光保存 2 周內(nèi)有效。

試劑五:終止液,60 mL×2 瓶, 4℃8℃冰箱保存 6 個(gè)月。

試劑六:3mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)液,2 mL×1 支, 4℃8℃冰箱保

6 個(gè)月。

三、操作步驟:

1、前處理:

上清液制備:取待測樣本 0.1mL,加入蛋白沉淀劑 0.6mL

勻,35004000 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,取上

清液進(jìn)行測定。

[]: 1、全血及時(shí)用蛋白沉淀劑制備成乳酸上清液。

2、制成的乳酸上清冰箱 4℃或者 0℃以下保存,

1530 天穩(wěn)定不變。

3、如果您的血樣很少,您可以取 0.05mL 全血加

0.3mL 蛋白沉淀劑。

五、注意點(diǎn):

1、應(yīng)取空腹或靜止?fàn)顟B(tài)下的靜脈血,并避免血液淤滯,如

用止血帶,應(yīng)在針頭刺入靜脈后馬上放開,然后等 2

鐘后再抽血。

2、血液要新鮮,最好是當(dāng)天完成,如果當(dāng)天完不成,可將

樣本進(jìn)行樣本前處理后,將上清液 4℃-20℃保存可穩(wěn)

1530 天。

3、蛋白沉淀劑如有結(jié)晶, 則取上清進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

4、在批量實(shí)驗(yàn)前需要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),以確定測定絕對(duì) OD(測

OD -空白 OD 值)在 0.050.35 之間。如果測定絕

對(duì) OD 小于 0.05,則需要加大樣本濃度重新測定;如果

測定絕對(duì) OD 大于 0.35,則需要將樣本稀釋后重新測定。

附錄:乳酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

1、前處理:

6mmol/L 的乳酸標(biāo)準(zhǔn)用雙蒸水稀釋成不同濃度:

1mmol/L2mmol/L、3mmol/L、4mmol/L、5mmol/L6mmol/L,

進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。(標(biāo)準(zhǔn)曲線僅供參考,用戶可以不做,

而且 6mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)液本試劑盒不提供,如有需要請(qǐng)咨詢本公

司)

全血乳酸(Lactic Acid LD)測定試劑盒 

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