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超微量 Ca +2Mg +2—ATP 酶測試盒 生化試劑

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超微量 Ca +2Mg +2—ATP 酶測試盒,ATP 酶存在于組織細胞及細胞器的膜上,是生物膜上的一種蛋白酶,它在物質運送、能量轉換以及信息傳遞方面具有重要的作用,機體在缺氧及一些疾病狀態下,此酶活力發生一系列改變。

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超微量 Ca +2Mg +2—ATP 酶測試盒

(測紅細胞)

一、測定意義:

ATP 酶存在于組織細胞及細胞器的膜上,是生物膜

上的一種蛋白酶,它在物質運送、能量轉換以及信息傳

遞方面具有重要的作用,機體在缺氧及一些疾病狀態下,

此酶活力發生一系列改變。

二、測定原理:

ATP 酶可分解 ATP 生成 ADP 及無機磷,測定無機磷的

量可判斷 ATP 酶活力的高低。

三、試劑組成與配制:(試劑盒有效期 6 個月)

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四、紅細胞的前處理:

1、紅細胞計數(見附錄)或血紅蛋白測定(試劑本所有售)。

2、紅細胞溶血液的制備:

a、壓積紅細胞溶血液的制備取肝素抗凝全血,1000

/分,離心 10 分鐘,棄上層血清,留下層壓積紅

細胞,取一定量的壓積紅細胞,加 49 倍的雙蒸水,

例如取 5μL 的壓積紅細胞加入 245μL 雙蒸水中,混

勻,使其充分溶血,對光觀察直至溶液透亮。如果

預試結果太高,再將溶血液稀釋成不同濃度再進行

預試后,再決定取樣濃度。

b、全血紅細胞溶血液的制備:取小鼠全血,輕輕搖勻,

取一定量的全血按照 1

24 的體積比加 24 倍雙蒸水,

制成 25 倍稀釋的溶血液,例如取 5μL 的全血加雙蒸

120μL 充分混勻,制成 25 倍稀釋的溶血液。對光

觀察直至溶液透亮。如果預試結果太高,再將溶血

液稀釋成不同濃度再進行預試后,再決定取樣濃度。

[ 1]:制備好的溶血液盡快進行檢測,否則易失活,

因而必須在所有的準備工作做好以后再配制

溶血液。

[ 2]:用不完的抗凝全血 4℃可保存 23 天, -20

以下保存一周或者更長時間。

[ 3]:不可用磷酸鹽緩沖液或含磷的試劑稀釋樣本。

[ 4]:預試結果將絕對吸光度值(測定管吸光度值

對照管吸光度值)控制在 0.2 左右為宜。

附錄Ⅰ:紅細胞計數法

紅細胞計數有以下三種方法,只需取其中一種即可以。

1、計數板直接紅細胞計數:

①、紅細胞稀釋液的配制:檸檬酸三鈉 3.8 克,甲醛

1mL,雙蒸水 100mL,混勻,4℃保存。

②、 1 支試管,加入紅細胞稀釋液 2mL,取抗凝全

10µl 加入試管稀釋液中,反復吹吸數次,

再將試管顛倒數次混勻。

③、取一滴稀釋血液灌入計數板。(應一次灌滿,而且

不要灌得太多。)

④、用高倍鏡計數左上、左下、右上、右下,中央 5

個中方格的紅細胞數,將數得的數字×10 10

即為每升血中的紅細胞數。

2、光電比濁法計紅細胞數:

取試管 1 支,加入上述紅細胞稀釋液 4mL,再

20µl 抗凝全血,加入 4mL 稀釋液中,反復吹吸數

次,再將試管顛倒數次混勻,立即倒入比色杯中,

540nm1cm 光徑,雙蒸水調零進行比色,記下

吸光度值。以計數板計數的紅細胞的數值為橫坐標,

以相應管的吸光度值為縱坐標,作標準曲線。您可

以不做曲線,用附錄Ⅱ參考標準曲線圖二(鼠紅細

胞數與比濁法吸光度換算曲線)。根據標準曲線查出

紅細胞數。

3、用血紅蛋白(Hb)來換算紅細胞數:

10µl 抗凝全血加入 2.5mL 血紅蛋白測試液

(本所有供應)中,混勻,靜置 10 分鐘,于 540nm

1cm 光徑,雙蒸水調零進行比色。將測得的吸光度

乘以 367.7 即為血紅蛋白的值。以計數板計數的紅細

胞的數值為橫坐標,以相應管的血紅蛋白數為縱坐

標,作標準曲線。您可以不做曲線,用附錄Ⅱ的參

考標準曲線圖一(鼠紅細胞數與血紅蛋白數的換算

曲線)。根據標準曲線查出紅細胞數。

超微量 Ca +2Mg +2—ATP 酶測試盒

 

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