精品人妻一区二区三区麻豆91,亚洲欧美成人综合一区,国产精品美女久久久久AV超清,99久久亚洲综合精品网站老司机

產(chǎn)品目錄 CATALOG
產(chǎn)品展示 PRODUCTS 當(dāng)前位置:首頁 > 產(chǎn)品展示 > > 生化試劑 > 鎳瓊脂糖凝膠

鎳瓊脂糖凝膠

  • 型   號(hào):
  • 參考價(jià):0~0

鎳瓊脂糖凝膠
英文名稱:Ni-Berpharose FF
貨號(hào):B2824
規(guī)格:1ml
本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)用,不做其它用途!

免費(fèi)咨詢:021-51870610

發(fā)郵件給我們:2409400669@qq.com

鎳瓊脂糖凝膠


英文名稱:Ni-Berpharose FF


貨號(hào):B2824


規(guī)格:1ml


1.      產(chǎn)品介紹


鎳-瓊脂糖凝膠FF以瓊脂糖微球?yàn)榛|(zhì),活化偶聯(lián)亞氨基二乙酸(IDA),之后螯合Ni2+。IDA是金屬螯合層析中最-常用的配體,和次氮基三乙酸(NTA)相比,IDA具有親和力強(qiáng)、載量高、可再生重復(fù)使用等優(yōu)點(diǎn)。


鎳-瓊脂糖凝膠FF主要用于純化含有組-氨酸標(biāo)簽(His-Tag)的重組蛋白。組-氨酸標(biāo)簽中的咪唑環(huán)同過渡金屬Ni2+形成穩(wěn)定的配位鍵,能特異、牢固和可逆地吸附在固定有Ni2+的基質(zhì)上,可通過增加咪唑濃度對(duì)重組蛋白進(jìn)行競爭洗脫。


2.規(guī)格


1ml(預(yù)裝柱)、5ml(預(yù)裝柱)、10ml(預(yù)裝柱)、20ml、100ml、500ml 純化流程


①平衡


鎳-瓊脂糖凝膠FF柱用2~5個(gè)柱體積的初始緩沖溶液進(jìn)行平衡。


建議流速為100 cm/h。


②上樣


(1)樣品一般溶解于pH6~8的初始緩沖液中。提高上樣緩沖液的pH值可以增大載量。


(2)緩沖液中不能含有EDTA和檸檬酸鹽,同時(shí)最好避免巰基乙醇、DTT等還原劑。


(3)常用緩沖液有10~100 mM磷酸鈉緩沖液、20~200 mM Tris-HCl緩沖液等。


(4)緩沖液中一般要加入0.15~0.5 M的NaCl以消除離子交換作用。


(5)初次使用鎳-瓊脂糖凝膠FF時(shí),推薦使用50 mM PBS(50 mM NaH2PO4,0.5 M NaCl,pH 7.4)作為初始緩沖液。


③洗脫


(1)增加咪唑濃度進(jìn)行洗脫是鎳-瓊脂糖凝膠FF最-常用的洗脫方法。


(2)咪唑?yàn)閴A性,相應(yīng)緩沖液配制后需要用HCl調(diào)節(jié)pH值。


(3)初次使用鎳-瓊脂糖凝膠FF時(shí),如不確定洗脫需要的咪唑濃度,推薦在初始緩沖液中分別加入10 mM、20 mM、50 mM、100 mM、200 mM、500 mM咪唑,濃度從低


到高分別洗脫和收集重組蛋白,之后通過SDS-PAGE電泳等方法鑒定洗脫結(jié)果。


(4)有條件的可以進(jìn)行咪唑梯度線性洗脫以確定較佳的洗脫條件。


 


洗脫方法


(1)降低pH洗脫:大多數(shù)蛋白在pH6~4會(huì)被洗脫下來(也可以在pH 3~4),緩沖液可以是醋酸鈉、檸檬酸和磷酸鹽緩沖體系。


(2)競爭性洗脫:線性增加或一步增加同金屬離子有親和力的競爭物質(zhì)的濃度(如0~0.5M咪唑、0~50 mM組-氨酸、0~2M NH4Cl)。梯度洗脫最好在起始緩沖液的恒定pH值下進(jìn)行。


(3)螯合劑洗脫:EDTA、EGTA等螯合劑可同金屬離子產(chǎn)生作用力,導(dǎo)致蛋白被洗脫下來。此法不能分離不同的蛋白,還會(huì)影響蛋白的吸附,導(dǎo)致融合蛋白無法掛柱。


注:降低pH洗脫和螯合劑洗脫會(huì)使得金屬離子脫落,下次使用前需要重新螯和金屬離子。最-常用的方法為競爭性洗脫。


上述洗脫方法,均須在緩沖液中加入150 ~500mM的NaCl以消除離子交換作用。


 


5.再生、清洗、保存


①凝膠再生


(1)多次使用后或需要更換螯合的金屬離子時(shí),必須將凝膠脫鎳再生。脫鎳方法:用5~10個(gè)柱體積的蒸餾水淋洗柱子,再用5~10個(gè)柱體積的100 mM EDTA淋洗柱子,最后用2~3個(gè)柱體積的0.5 M NaCl洗掉殘留的EDTA。


(2)多次使用的柱子脫鎳后一般需要進(jìn)行清洗。清洗方法:用0.1~1.0 M NaOH反向清洗柱子,50 cm/h保持1~2 h,能去除結(jié)合強(qiáng)的雜質(zhì),同時(shí)也能去除熱源。


(3)清洗后需要重新螯合金屬離子。螯合方法:用2~5個(gè)柱體積的蒸餾水充分平衡脫鎳后的柱子,用0.1~0.3 M金屬鹽溶液過柱5~10個(gè)柱體積以螯合金屬離子,之后用5~10個(gè)柱體積的蒸餾水淋洗以去除未螯合的金屬離子。


②在位清洗


(1)去除因離子交換作用吸附的蛋白:2~3個(gè)柱體積的2 M NaCl溶液反向清洗。


(2)去除強(qiáng)疏水性蛋白和脂質(zhì)等:4個(gè)柱體積的70%乙醇或者30%異丙醇反向清洗。


(3)除去蛋白沉淀、疏水性蛋白:參照凝膠再生步驟。



6.注意事項(xiàng):


1)使用時(shí)保證柱子和緩沖液的溫度一致,避免柱床內(nèi)產(chǎn)生氣泡,影響純化效果。


2)本產(chǎn)品保存條件為20%乙醇,4~8℃。


3) 2-25℃,常壓,避光運(yùn)輸


4)僅供科研實(shí)驗(yàn)使用


鎳瓊脂糖凝膠


留言框

  • 產(chǎn)品:

  • 您的單位:

  • 您的姓名:

  • 聯(lián)系電話:

  • 常用郵箱:

  • 省份:

  • 詳細(xì)地址:

  • 補(bǔ)充說明:

  • 驗(yàn)證碼:

    請(qǐng)輸入計(jì)算結(jié)果(填寫阿拉伯?dāng)?shù)字),如:三加四=7

聯(lián)系我們 

地址:上海市顧戴路2988號(hào)B幢7樓
電話:021-51870610
郵箱:2409400669@qq.com
傳真:021-51870610
郵編:201108

手機(jī)
13764793648
座機(jī)
4008-013-053
021-51870610
點(diǎn)擊這里給我發(fā)消息
 

環(huán)保在線

推薦收藏該企業(yè)網(wǎng)站