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鏈親和素瓊脂糖凝膠FF

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鏈親和素瓊脂糖凝膠FF
英文名稱:Streptavidin Berpharose FF
貨號(hào):B2830
規(guī)格:5ml
本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)用,不做其它用途!

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鏈親和素瓊脂糖凝膠FF


英文名稱:Streptavidin Berpharose FF


貨號(hào):B2830


規(guī)格:5ml


1.產(chǎn)品介紹


鏈霉親和素瓊脂糖凝膠FF(Streptavidin Berpharose FF)是一種將鏈霉親和素(Streptavidin)鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的親和層析分離介質(zhì),利用生物-素與鏈霉親和素配體之間的相互作用分離純化生物-素或生物-素化的抗原、抗體、核酸等物質(zhì)。


鏈霉親和素與生物之間的親和力很強(qiáng),需要在變性條件下洗脫,這個(gè)特性可用于抗原與抗體的分離,如將生物-素化的抗體結(jié)合在凝膠上,然后利用抗原抗體的親和特性純化無(wú)生物-素化的抗原,抗原洗脫時(shí)抗體不會(huì)被洗脫。鏈霉親和素對(duì)亞氨基生物-素的親和力相對(duì)較弱,可以在pH9.5-11.0結(jié)合,pH4.0時(shí)洗脫,不需要使用變性劑所以能更好的保持親和素偶聯(lián)物的活性。                   


2.規(guī)格


1ml(預(yù)裝柱)、5ml(預(yù)裝柱)、10ml(預(yù)裝柱)、20ml、100ml、500ml 純化流程


①緩沖液:


(1)純化生物-素或生物-素化物質(zhì)


結(jié)合緩沖液:20mM NaH2PO4, 150mM NaCl,pH7.4


洗脫緩沖液:8M鹽酸胍,pH1.5


(2)純化2-亞氨基生物-素或2-亞氨基生物-素標(biāo)記的物質(zhì)


結(jié)合緩沖液:50mM碳酸銨,500mM NaCl,pH10.0


洗脫緩沖液:50mM乙酸銨,500mM NaCl,pH4.0


(3)純化抗原或抗體


結(jié)合緩沖液:20mM NaH2PO4,150mM NaCl,pH7.4


洗脫緩沖液:100mM甘-氨酸-鹽酸,pH3.0


注:


用于生物-素化的抗體純化未生物-素化的抗原(或生物-素化的抗原純化未生物-素化的抗體)有2種方法,①可先在游離狀態(tài)下抗原與抗體結(jié)合,然后當(dāng)樣品純化即可;②也可以將生物-素化的抗體(或抗原)先結(jié)合柱上,然后對(duì)應(yīng)的未生物-素化的抗原(或抗體)當(dāng)樣品純化。


②樣品準(zhǔn)備


上柱的樣品應(yīng)盡量保持與結(jié)合緩沖液一致。通常可用透析、超濾、稀釋等方法處理樣品。并且上柱前應(yīng)過(guò)0.45μm濾膜或高速離心去除不溶物。


③樣品純化


(1)取適量的鏈霉親和素瓊脂糖凝膠FF裝入合適的層析柱中,用結(jié)合緩沖液平衡5個(gè)柱體積,建議流速為100cm/h。


(2)將準(zhǔn)備好的樣品緩慢上柱,為保證樣品與鏈霉親和素充分結(jié)合,應(yīng)控制好上樣流速,建議流速為15-50cm/h。


(3)上樣后用結(jié)合緩沖液平衡10個(gè)柱體積以上,或平衡至基線,洗去雜質(zhì),推薦流速為100cm/h。


(4)用洗脫緩沖液洗10-20個(gè)柱體積,建議流速為100cm/h,收集的洗脫液應(yīng)立即調(diào)節(jié)pH至穩(wěn)定范圍,并根據(jù)需要置換緩沖液。


(5)洗脫目的蛋白后的柱子應(yīng)立即用中性的結(jié)合緩沖液平衡,并用20%乙醇保存柱子,或進(jìn)行下一次純化。


6.注意事項(xiàng):


1)使用時(shí)保證柱子和緩沖液的溫度一致,避免柱床內(nèi)產(chǎn)生氣泡,影響純化效果。


2)去除一些沉淀或變性物質(zhì),建議使用下面的方法用2倍柱體積的0.1M NaOH或6M鹽酸胍或8M尿素溶液進(jìn)行清洗,然后立即用5倍柱體積的PBS,pH7.4清洗。去除一些疏水性吸附造成的非特異性吸附物質(zhì)3-4倍柱體積70%乙醇或2倍柱體積的1% TritonX-100清洗,然后立即用5倍柱體積的PBS,pH 7.4清洗。


3)本產(chǎn)品保存條件為20%乙醇,4~8℃。


4) 2-25℃,常壓,避光運(yùn)輸。


5)僅供科研實(shí)驗(yàn)使用。


鏈親和素瓊脂糖凝膠FF


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