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轉(zhuǎn)鐵蛋白(TF)單克隆包被抗體

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轉(zhuǎn)鐵蛋白(TF)單克隆包被抗體
轉(zhuǎn)鐵蛋白是正常血清中的一種蛋白成分,為β球蛋白中能和鐵結(jié)合的一種糖蛋白,主要功能是轉(zhuǎn)運(yùn)鐵,調(diào)節(jié)鐵的吸收,防止鐵中毒,并有抗細(xì)菌和抗病毒的功能。

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有人認(rèn)為單抗比多抗好,其實(shí)這并不是一個(gè)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)挠^點(diǎn),只能說(shuō)在可能性上單抗的特異性更好一些,而多抗的親和力會(huì)優(yōu)于單抗,并且特異性并不一定就遜于單抗,主要看抗原的設(shè)計(jì)水平。目前商品化抗體里單抗主要是鼠單抗、兔單抗,多抗主要是兔多抗、山羊多抗等,其他種屬來(lái)源抗體較少。不建議糾結(jié)于單抗好還是多抗好,能做出實(shí)驗(yàn)的抗體就是好抗體。


 在選擇上一般建議實(shí)驗(yàn)種屬和抗體種屬親緣性越遠(yuǎn)越好,不宜同源??贵w不同種屬會(huì)要影響接下來(lái)二抗的選配。特別是在免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)中,需要在區(qū)別于實(shí)驗(yàn)種屬的基礎(chǔ)上,區(qū)分開(kāi)兩個(gè)指標(biāo)的抗體種屬來(lái)源,以便于二抗區(qū)別識(shí)別。


抗體選擇與使用過(guò)程中,多少還會(huì)遇到一些意想不到的事情。有些細(xì)節(jié),還是需要多注意一些。如在選擇做阻斷或中和實(shí)驗(yàn)時(shí),有時(shí)需要將抗體加到細(xì)胞培養(yǎng)液中,這是需要注意抗體是否含有疊氮鈉。如果是大包裝的抗體,進(jìn)行分裝是比較節(jié)約的方式,如果是高效價(jià)的,可以配成母液再分裝。抗體的短時(shí)間運(yùn)輸,用普通冰塊保持溫度是可以滿足要求的。


另外不要糾結(jié)于 WB 過(guò)程中分子量的問(wèn)題。很多時(shí)候,我們看到同樣的抗體,不同的品牌,甚至同一品牌不同的貨號(hào),標(biāo)注的分子量都不一樣。其實(shí)可能只是生物試劑商只檢測(cè)時(shí)使用了不同的種屬不同的樣品類(lèi)型,或是參照了不同的文獻(xiàn),對(duì)使用者來(lái)說(shuō),同樣的樣品,不管使用哪個(gè)品牌的,只要抗體是對(duì)的,目的條帶只會(huì)出現(xiàn)在相同的位置。關(guān)于分子量的問(wèn)題,一般不建議看產(chǎn)品說(shuō)明,WB 中條帶的位置由樣品決定,并不會(huì)因?yàn)榭贵w不同而不同。所以在檢測(cè)蛋白之前,我們可以通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)或參考文獻(xiàn),對(duì)將要檢測(cè)的蛋白做個(gè)比較全面的了解,包括其可能剪切與修飾的情況、表型的情況等。在第一次使用一個(gè)新的抗體時(shí),不要根據(jù)分子量橫向剪膜,可以保留幾個(gè)全泳道,看看條帶位置或分布的情況。

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