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細胞核-胞漿蛋白-胞膜制備試劑盒

本試劑盒能夠從哺乳動物新鮮或凍存的組織塊、貼壁或懸浮細胞中制備細胞核、細胞膜與胞內質膜、細胞漿等三種主要亞細胞組分。其*的試劑成分與優化的制備方案使細胞核-胞漿-胞膜制備過程簡單易行，無需特殊設備和超速離心，可在1小時內完成。應用本試劑盒制備的胞膜是細胞膜和細胞器膜如線粒體、內質網及質膜的混合物；得到的細胞核是完整的未裂解細胞核，胞漿組分為可溶性胞漿蛋白。制備得到的產物純度可勝任后續的免疫沉淀、蛋白印跡、2-D gel、酶活性檢測和受體分析等實驗。

操作步驟：

    1、 樣本預處理

2、  組織細胞勻漿裂解

3、 粗提物制備

4、 胞膜胞漿制備

5、 細胞核制備：

說明：

1.  Suspension Buffer 不含去垢劑，重懸于Suspension Buffer 中的胞膜或胞核組分呈不溶解狀態是正常的，用戶可用自備溶液重懸胞膜或胞核成分。如果進行蛋白印跡、2-D get等實驗，用戶可用SDS上樣緩沖直接裂解細胞膜或細胞核成分。對于進行免疫共沉淀實驗來說，可用RIPA裂解液（C1053）重懸胞膜或胞核組分。

2.  胞漿組分可直接進行蛋白定量。胞核組分如需定量可加入TritonX-100至終濃度1%或SDS至終濃度0.5%用BCA法蛋白定量。

3.  用SDS-PAGE Loading 緩沖液裂解細胞核后，DNA釋放會使核裂解物十分粘稠，可95^oC加熱5分鐘，高速震蕩打斷DNA，重復加熱2-3次。

4.  如果進行凝膠阻滯（EMSA）實驗，建議使用普利萊P1200產品，該試劑盒可直接提取可溶性核蛋白.

5. 試劑盒各組分中未添加蛋白酶抑制劑，用戶可自行選擇添加，通常4^oC快速操作不加蛋白酶抑制劑不會出現問題。

6.  沉淀胞漿蛋白方法：估算胞漿蛋白組分的體積，加入1/3體積30%三氯醋酸水溶液，-20 ^oC沉淀1小時或過夜。5,000g, 4 ^oC離心10分鐘，棄上清，空氣略干沉淀。用1xSDS上樣緩沖液溶解沉淀，95^oC加熱5分鐘，上樣電泳。

 細胞核-胞漿蛋白-胞膜制備試劑盒