過(guò)氧化氫酶（CAT）測(cè)定試劑盒（動(dòng)物組織）

（紫外法）

一、測(cè)定意義：

氫氧自由基（OH·）是化學(xué)性質(zhì)最活潑的活性氧，它

幾乎與細(xì)胞內(nèi)的每一類(lèi)有機(jī)物如糖、氨基酸、磷脂、核苷

酸和有機(jī)酸等都能反應(yīng)，并且有非常高的速度常數(shù)，因此

它具有破壞性，但它可以被過(guò)氧化氫酶分解，因而測(cè)定

過(guò)氧化氫酶的高低就有其重要意義。

二、測(cè)定原理：

紅細(xì)胞或組織中過(guò)氧化氫酶（Catalase）在一定條件下

能直接分解其底物過(guò)氧化氫（H2O2），使 H2O2 在反應(yīng)液

中的濃度逐漸降低，相應(yīng)的吸光度也逐漸下降。

三、試劑組成與配制（100 管/96 樣）：

試劑一：30mL 水劑貯備液×1 瓶，4℃可保存 6 個(gè)月。

試劑二：甲粉×1 瓶，乙粉×1 瓶，4℃可保存 6 個(gè)月。用時(shí)

各加雙蒸水 200mL，溶解后混合一起，再用

雙蒸水定容至 500mL，配成試劑二應(yīng)用液，4℃保

存 3 個(gè)月。

五﹑操作步驟：

1﹑樣本前處理：

①﹑溶血液的制備：

取老鼠的新鮮血液 50μL 加雙蒸水至 2.5mL

混勻配成 1:49 溶血液。

②﹑1%肝組織勻漿的制備：

按《實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》制備 10%肝組織勻漿，再

取部分 10%肝組織勻漿,用生理鹽水按

1︰

9 稀釋制備成 1%肝組織勻漿。

注：如果樣本（腦組織、神經(jīng)組織等）的 CAT 活力太低，

可以加大樣本濃度或增加取樣量。

2﹑測(cè)定過(guò)程：

取 1cm 光徑石英比色皿，紫外 240nm，雙蒸水調(diào)零

備用。取經(jīng)過(guò)前處理的樣本 0.02mL 加入比色皿底部，

將已預(yù)溫至25℃，OD在0.5～0.55 之間的底物溶液3mL

直接用 5mL 或 10mL 的大移液器快速?zèng)_入比色皿中，

240nm 處立即測(cè)定吸光度，記下 A1值，比色皿不要取

出，1 分鐘時(shí)立即再測(cè)一次吸光度，記下 A2 值。（沒(méi)

有大移液器可用滴管或細(xì)玻棒快速混勻 1～2 次）

七、注意點(diǎn)：

1、為了減少誤差，兩只石英比色杯要進(jìn)行校正。

2、每次加樣前比色杯要用雙蒸水沖洗 2～3 次，扣干備用。

3、每次比色前（加樣前）比色杯的透光面要用擦鏡紙擦干

凈。

4、比色與計(jì)時(shí)要同步，最好為二個(gè)人或者用自動(dòng)生化分析

儀。

5、加樣品量不可太大，以免產(chǎn)生氣泡影響吸光度。

6、1:100 的溶血液放置室溫下不可超過(guò) 2 小時(shí)。

7、腦組織和神經(jīng)組織中過(guò)氧化氫酶活力非常低。

 過(guò)氧化氫酶（CAT）測(cè)定試劑盒（動(dòng)物組織）