如果正確使用細(xì)胞培養(yǎng)級鼠尾膠原蛋白 I型
更新時間：2020-10-16 點(diǎn)擊次數(shù)：853次如果正確使用細(xì)胞培養(yǎng)級鼠尾膠原蛋白 I型
上海信帆生物供應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)級鼠尾膠原蛋白 I型，產(chǎn)品現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量穩(wěn)定！
鼠尾膠原蛋白 I型(rat tail tendon collagen type I)說明書
產(chǎn)品說明
鼠尾膠原蛋白 I型(rat tail tendon collagen type I),5mg/ml, 溶解于 0.006mol/L 乙酸, 無菌。
4度保存，切勿凍存，有效期一年。
本公司生物試劑的鼠尾膠原蛋白 I型(rat tail tendon collagen type I)是通過 Birkedal-Hansen1 的方法，通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。
鼠尾膠原蛋白可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿，培養(yǎng)一些在普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細(xì)胞。也可用于制備三維膠，模擬真實(shí)的生長環(huán)境，使細(xì)胞在三維環(huán)境中生長。
使用方法
1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被 濃度： 1-5ug/cm2
以包被濃度為 2 ug/cm2 為例：
用無菌0.006mol/L(0.36g/L) 乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/ml。按表 (一)體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中：
表面積(cm2 ,每孔或每皿) | 加入 0.012mg/ml 膠原的體積 ( ul ) | |
96孔細(xì)胞培養(yǎng)板 | 0.3 | 50 |
24孔細(xì)胞培養(yǎng)板 | 1.9 | 300 |
12孔細(xì)胞培養(yǎng)板 | 3.8 | 600 |
6孔細(xì)胞培養(yǎng)板 | 9.5 | 1580 |
35mm細(xì)胞培養(yǎng)皿 | 8 | 1330 |
60mm細(xì)胞培養(yǎng)皿 | 21 | 3500 |
100mm細(xì)胞培養(yǎng)皿 | 55 | 9170 |
確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面，開蓋在超凈臺上過夜晾干。 也可以在室溫放置 1小時后，用PBS洗3-4次后直接使用。
包被好的器皿在 4-25℃至少可保存3個月以上的時間。
2、三維膠原的制備
鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上，pH 7左右時可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中，在成膠過程中需要加入0.06X 體積的 0.1mol/L NaOH 來中和。
需要的溶液 ( 均需要 無菌 、 預(yù)冷 ): 10xPBS( 可含10 mg/L的酚紅用于 pH 指示 )或 10x 培養(yǎng)液 , 0.1mol/L NaOH, 0.1mol/L 乙酸(一般不用), 雙蒸水
A．不含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：將200ul 鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入 690ul H2O。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入100ul 10xPBS或10x培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試)。將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10xPBS，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。
B．含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞，并放置于冰浴中。將200ul 鼠尾膠原蛋白I型 (5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入23ul 10xPBS或10x培養(yǎng)液，混勻(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細(xì)胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
注：鼠尾膠原蛋白I型在室溫下pH中性時可迅速成膠，在操作過程中要盡量保持低溫。
本產(chǎn)品于實(shí)驗(yàn)室研究用。
如果正確使用細(xì)胞培養(yǎng)級鼠尾膠原蛋白 I型
