小鼠白細胞介素1β（IL-1β）ELISA試劑盒如何正確使用
更新時間：2020-06-16 點擊次數：779次小鼠白細胞介素1β（IL-1β）ELISA試劑盒如何正確使用
上海信帆生物供應小鼠白細胞介素1β（IL-1β）ELISA試劑盒，質量穩定，庫存充足，多家科研院校訂購過，并發表過多篇文章，歡迎垂詢！
小鼠白細胞介素1β（IL-1β）ELISA檢測試劑盒
檢測原理
試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被小鼠白細胞介素1β（IL-1β）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠白細胞介素1β（IL-1β）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
在收集樣本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天就進行檢測的樣本，及時儲存在4℃備用。對于隔天再檢測的樣本，及時分裝后凍存在-20℃備用，有條件的，好-70℃凍存備用。標本應避免反復凍融。
液體類標本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。
1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。
2.血漿：應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。
3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4.細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。
5.培養細胞：檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
6.組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑，用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性
自備物品
酶標儀（450nm）
高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
37℃恒溫箱
操作注意事項
試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡60分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正?，F象，水浴加熱使結晶*溶解后再使用。樣本在使用前也要在室溫平衡60分鐘。
實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
預處理后的樣本無需稀釋，直接取10μL加樣即可。
嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
所有液體組分使用前充分搖勻。
洗板方法
手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
結果判斷
繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。
試劑盒性能
準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9900。
靈敏度：低檢測濃度小于0.1 pg/mL。
特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
重復性：板內變異系數小于10%、板間變異系數小于15%。
貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
有效期：6個月
小鼠白細胞介素1β（IL-1β）ELISA試劑盒如何正確使用
