Tn5轉座酶現貨供應-上海信帆生物
更新時間：2019-10-23 點擊次數：1036次Tn5轉座酶現貨供應-上海信帆生物
上海信帆生物供應Robust Tn5 轉座酶，產品現貨供應，大家有需要可以隨時咨詢！
Robust Tn5 轉座酶
Robustnique
體外轉基因操作:
Robust Tn5轉座酶可以將含有成對識別序列的雙鏈DNA段（如下圖所示）隨機整合到宿主細胞的基因組中。整合的過程分為兩步：
首先，Robust Tn5轉座酶同含有選擇標記和識別序列的目標基因片段結合，形成轉座體（Transposome）；之后，通過轉化的方式將
轉座體導入宿主細胞，利用選擇標記篩選成功整合目標基因的宿主細胞。
核酸外切酶活性：50 μl反應體系中，20 U本酶與1 μg的pUC19質粒于37°C下溫育4小時，DNA的電泳條帶無明顯變化。
RNase活性：50 μl反應體系中，100 U本酶與250 ng大腸桿菌rRNA于37°C溫育2小時，經瓊脂糖電泳檢測，被降解的rRNA小于1%。
1. Zhou, M., Bhasin, A., and Reznikoff, W. S. (1998) J. Mol. Biol. 276, 913-925.
2. Ason, B., Reznikoff, W. S. (2004) J. Mol. Biol. 335, 1213-1225.
質量控制檢測:
參考文獻:
應用:
概述：Robust Tn5轉座酶是野生型Tn5轉座酶的高活性突變體，可以的將Tn5轉座子插入到目標序列。Robust Tn5轉座酶識別Tn5
轉座子酶序列的內端（inside end，IE）、外端（outside end，OE）和嵌合端（mosaic end，ME）序列，含有ME序列片段的體外轉
座效率高(1)。Robust Tn5轉座酶的插入位點具有很高的隨機性(2) ，因此被廣泛的用于體外轉基因（外源基因整合到宿主細胞）和二代
測序建庫等領域。
來源：含有Robust Tn5轉座酶序列的大腸桿菌菌株。
應用：體外轉基因（外源基因整合到宿主細胞），二代測序建庫。
貯存溶液：50 mM Tris-HCl (pH 8.0 @ 25 °C)，100 mM NaCl，0.1 mM EDTA，0.1% Triton X-100和50%甘油(V/V)。
反應緩沖液：（隨酶提供）10x轉座反應緩沖液。
單位定義：1單位Robust Tn5轉座酶指37°C條件下反應1小時，*切割1 μg含有識別序列的DNA段所需要的酶量。
重組酶
包裝:
濃度:
存儲:
25 U
1,000 U/ml
-20°C
該反應體系可根據需要進行放大。
1.2 充分混勻，室溫（25 °C ）放置30分鐘。
1.3 取1-4 μl反應產物進行后續的轉化實驗，反應產物也可放置于-20°C備用。
2 轉化
可以使用的轉化方法有電轉化，化學轉化等。轉化后利用選擇性標記篩選成功整合目標基因的宿主細胞。
1 轉座體（Transposome）的構建*
1.1 準備如下反應體系：
成分
目標基因片段(含選擇標記和成對識別序列,100 μg/ml)
Robust Tn5轉座酶
100%甘油
體積
2 μl
4 μl
2 μl
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TnsABC*轉座酶可用在GPSTM系列系統中（GPS-1基因組測序系統，GPS-M突變系統和GPS-LS蛋白質結構分析系統）將pGPS質粒中的Transprimer轉座元件體外隨機插入到任何期望的靶DNA內(1-3)。
來源
三個組成蛋白分別從含有編碼TnsA、TnsB和TnsC*的質粒的E.coliK-12中純化獲得。
應用
用于GPS系統中所用到的Tn7源轉座子的轉位。
反應緩沖液
1×GPSBuffer25mMTris-HCl,2mMATP,2mMDTT(pH8.0@25°C)。補充15mM鏈轉移反應起始溶液。37°C溫育。
單位定義
在用0.08µg2.8kb對照質粒的標準對照反應體系中，能使至少1%的靶分子獲得轉座子插入所需要的酶量定義為一個單位。
熱失活：75°C10分鐘。
Tn5轉座酶現貨供應-上海信帆生物
