反轉錄試劑盒的組成和使用方法
更新時間：2019-05-13 點擊次數(shù)：2090次反轉錄試劑盒的組成和使用方法，上海信帆生物供應反轉錄試劑盒，該產(chǎn)品質量穩(wěn)定，*！如果有需要，可以找上海信帆生物科技有限公司。
通用反轉錄試劑盒(M-MLV)
規(guī)格：50T/100T
保存：-20℃保存，避免反復凍融，復檢期為 1 年。
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑盒組成 50 次 100 次
M-MLV(200U/μL) 50μL 50μL×2
5×M-MLV Buffer 200μL 400μL
Oligo(dT)16(10uM) 100μL 200μL
RNasin(40U/μL) 25μL 50μL
dNTPs(10mM) 50μL 100μL
RNase-free ddH2O 1mL 1mL×2
說明書 1 份 1 份
產(chǎn)品簡介：
本試劑盒適用于各種 RNA 制品的反轉錄反應。它采用 M-MLV 進行反轉錄反應，能夠獲得較
長的反轉錄產(chǎn)物用于后續(xù)的 PCR 擴增和分子克隆實驗。
本試劑盒中配置的酶為進口的酶。RT 酶采用進口的 M-MLV，所以 cDNA 更長，基因的信息保
留得更完整！反轉錄過程中特異的 RNase 抑制劑可有效降低由于外源 RNase 污染而導致實驗失敗的
風險。本試劑盒使用方便、快捷，可廣泛用于 cDNA 克隆及目的基因檢測等分子生物學實驗。
操作步驟：
一、反轉錄反應
1、在冰浴的無 RNase 的離心管中加入如下反應成分：
1-5μg 總 RNA 或 50-500ng mRNA
2μL Oligo(dT)16或 2 pmole 基因特異性引物
補 RNase-free ddH2O 至 14.5μL
2、70℃保溫 5min 后迅速在冰上冷卻 2min，簡短離心收集反應液后加入以下各組分：
4μL 5×M-MLV Buffer
1μL dNTPs
0.5μL RNasin
1μL M-MLV
3、42℃溫浴 60min，如果是用隨機引物，請先將離心管置 25℃溫浴 10min，再 42℃溫浴 60min。
4、95℃加熱 5min 終止反應，置冰上進行后續(xù)實驗或-20℃保存。
5、若用于后續(xù) PCR 擴增,用 RNase-free ddH2O 將反應體系稀釋到 50μL，取 2-5μL 作為 PCR 反應模板。
注意事項：
1、用于 cDNA 合成反應的相關試劑和耗材盡可能用 DEPC 進行處理，并在高壓滅菌后使用。有些
試劑不能高壓滅菌時，首先用經(jīng)過滅菌的器具、水等配制溶液后，再將溶液進行過濾除菌處理。
2、試劑盒的各組分應在-20℃保存，避免反復凍融，有效期 12 個月。
3、RNA 樣品要避免反復多次凍融，應使 RNA 在冰浴中處于融化狀態(tài)。
反轉錄試劑盒的組成和使用方法
