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測(cè)定意義：
 

氧自由基作用于脂質(zhì)的不飽和脂肪酸，生成過(guò)氧化脂質(zhì)；后者逐漸分解為一系列復(fù)雜的化合
物，其中包括MDA。通過(guò)檢測(cè)MDA 的水平即可檢測(cè)脂質(zhì)氧化的水平。
 

測(cè)定原理：
 

MDA 與硫代酸(thiobarbituric acid，TBA)縮合，生成紅色產(chǎn)物，在532nm 有zui大吸收
峰，進(jìn)行比色后可估測(cè)樣品中過(guò)氧化脂質(zhì)的含量；同時(shí)測(cè)定600nm 下的吸光度，利用532nm
與600nm 下的吸光度的差值計(jì)算MDA 的含量。
 

需自備的儀器和用品：
 

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、
研缽、冰和蒸餾水。
 

試劑的組成和配置：
 

提取液：液體100mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體30mL×1 瓶，4℃保存；

MDA 提取：

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量
（104 個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1 的比例（建議500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL 提
取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30 次）；
8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約0.1g 組織，
加入1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)

注意事項(xiàng)：
 

臨用前注意試劑一是否*溶解，如未溶解，可以70℃-90℃加熱，并振蕩以促進(jìn)溶解。

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