皮質醇（CORT）放免試劑盒-*
更新時間：2016-07-25 點擊次數：1488次皮質醇（CORT）放免試劑盒-*
皮質醇放射免疫試劑
預期用途：
用于體外診斷。
該藥盒定量檢測血清、血漿及尿液中皮紙醇的水平。
摘要：
皮質醇是腎上腺皮質分泌的zui主要的糖皮質激素，其生理效應為抗炎癥活
性，維持血壓和由蛋白合成糖的過程。
糖皮質激素在促腎上腺皮質激素（ACTH）的刺激下合成。ACTH 由垂體前
葉分泌。在一般個體中，ACTH 存在時，皮質醇通過下丘腦-垂體-腎上腺皮質這
個軸線（HPA 軸線）參與一個負反饋循環，而垂體ACTH 是受下丘腦分泌的ACTH
釋放因子（CRF）調控的，下丘腦CRF 受皮質醇水平的影響產生應激。生理及
心理上的應激，晝夜變化和低血糖又影響著皮質醇的分泌速度。
HPA 軸上每個器官出現問題都會導致皮質醇水平發生變化，用血清或血漿
中皮質醇的水平來衡量腎上腺功能狀況有助于常規和非常規診斷。早晚檢測與刺
激和抑制試驗結合起來可為特殊的腎上腺疾病診斷提供有利依據。阿狄森氏病
（慢性腎上腺皮質機能減退癥）以及柯興氏綜合癥（腎上腺皮質分泌過盛）的診
斷就是循環中皮質醇水平的特異分析有助于診斷的兩個例子。
方法原理：
該方法以放射免疫測定的競爭性結合原理為基礎。標準品和未知樣品包被管
中一起溫育，抗體包被于試管底部。溫育后將管內物質吸出或倒出，計數。在1～
60μg/dl 范圍內，以5 個血清標準坐標準曲線，未知樣品值可從標準曲線中查得。
整個反應在包被管中進行。對于血清，尿液或血漿樣本來說，未分離樣本的稀釋，
蛋白質的變性或提取步驟是必須的。
除了非提取尿皮質醇分析外，該藥盒也可用于尿液中游離皮質醇的測定。首
先用亞甲基氯化物提取尿液中皮質醇，將提取物的一個等份式樣在包被管中直接
脫水（試驗證明如果使用的亞甲基氯化物，不會有損于包被管）。為確保樣
本中含有適當水平的蛋白質，向每個包被管中加入10μl 皮質醇血清空白，其余
測定過程同血清，血漿和非提取尿皮脂醇。應監控使用亞甲基氯化物提取尿中皮
)
質醇的效率。
試劑：
規格：CA-1529-100T
CA-1549-500T
緩沖液的介紹看試劑制備部分。所有試劑（包括緩沖液）在2～8℃下貯存，
保質期內是穩定的。包被管可貯存在2~27℃，不要使用過期試劑。每一藥盒的
組分首先指的是100T，然后指的是500T。
1. 125I 皮質醇標記物
Cat.No. CA-2649
每盒1 瓶/5 瓶
每瓶有10ml 磷酸鹽緩沖液，內含大約4μCi 標記物（<1μg/ml 皮質醇）,
以0.1%爹氮化鈉作為防腐劑的ANS（8-Anili-萘磺酸）。
2. 兔抗皮質醇血清包被管
Cat.No. CA-2167
每盒100T/500T
12×75mm 包被管，并用一塑料包包裝。
3. PBS 緩沖液
Cat.No. CA-2715
每盒1/5
每小瓶含有100ml 磷酸鹽緩沖液，0.1%*作為防腐劑。
4. 皮質醇血清空白
Cat.No. CA-236
每小瓶含1ml 處理過的人血清，0.1%*作為防腐劑。
5. 皮質醇血清標準
Cat.No. CA-2358，CA-2359，CA-2370，CA-2371，CA-2372
每盒1/5
每小瓶有1ml 處理過的血清，內含皮質醇，0.1%*作為防腐劑，所
供標準品濃度如下：分別為1、3、10、25 和60μg/dl
6. 備用標簽
每盒1/5
7. 可選
半對數繪圖紙
每盒50 張。
警告和預防措施
用于體外診斷
不適于人和動物外服或內用。
潛在傳染源的處理：
在制備本產品中所使用的每一血清和血漿捐獻者單位，均已采用FDA 提供
的方法測試過，發現對存在的HbsAg，HCV 抗體和HIV 抗體均無反應。盡管這
些方法具有高度的準確性，但也無法保證能發現所有的感染單位。本產品仍可能
含有其他能通過測試的人源物質。因此，沒有已知的測定方法可以給出滿意的保
證（既保證不存在乙肝病毒，丙肝病毒和HIV 病毒或其他傳染因素），因而其
使用和運輸必須在良好的實驗規程和適當的防衛措施下，按照國家相關政策進
行。
含*的試劑：
警告：本藥盒中部分試劑含有*，*可與含銅、鉛的裝置反應
形成易爆炸的金屬疊氮化物，其處理是沖入大量的水以防止疊氮化物的積聚，更
進一步的資料參閱“Decontamination of Laboratory Sink to Remove Azide Salts”
含125I 的試劑：
此試劑含有放射性物質，其運輸和使用應在適當的防護措施及良好的實驗規
程下進行。
1 其貯存應被限制在特定地點
2 對其接近限定為被授權本人
3 禁止用嘴吸取放射性物質
4 禁止在放射性工作地點吃飯或飲水
5 擦凈可能發生溢出的地方，再用堿性去污劑或放射性去污溶液清洗。任何
使用過的玻璃器具在清洗其它實驗室玻璃器具前，必須用清水*清洗干凈。
領取從事放射性的實驗人員或機構應持有的特定許可證
警告：此產品含有加利福尼亞州所知的致癌物
注意：印于包裝上的放射性與印于盒子標簽及標記物小瓶標簽上的放射性有
輕微區別。盒子標簽和標記物小瓶標簽表明校準日起的準確放射性數量，而包
裝上表明的是試劑盒的理論放射性數量。
試劑的配制：
將小瓶內的標記物加入到1 瓶磷酸鹽緩沖液中，充分混勻后，用混合液沖洗
標記物瓶以zui大限度的轉移標記物。將混合液裝入易識別的容器中，貼上備用標
簽，將其置于黑暗中保存或用金屬箔包裹，溫度控制在2~8℃。
樣品要求：
樣品的收集和處理：
血漿樣本：
靜脈取血放在含有肝素或DETA 的試管中，分理處小分血漿，2~8℃冷藏可過
夜，長時間則學–20℃凍存。避免使用溶血、脂血和黃疸性血樣。
血清樣本：
盡管皮質醇檢測通常使用血漿樣本，但也可使用血清樣本獲得相似結果。
靜脈取血放在試管中，不用任何添加劑。分離出血清部分，2~8℃冷藏可過夜
長時間則學–20℃凍存。避免使用溶血、脂血和黃疸性血樣。
尿樣：
收集24 小時尿樣，記下尿的容量，每升尿添加10 克硼酸作為防腐劑，充分混
勻后–20℃凍存。使用前，室溫融化樣本并充分混勻。
檢測過程：
成功使用該藥盒，必須*理解該部分內容，嚴格按照文中所述，仔細操作
實驗每一步以獲得可靠結果。藥盒各部分都作為整體單位使用。許多部分單個測
定不能混用。不能使用過期藥盒。每一次檢測都必須做一條標準曲線。
未提供需自備的材料：
1. 恒溫水浴鍋，37±2℃
2. 10μl 吸管
3. 1.0ml 半自動吸管
4. γ-計數儀
5. 檢測用試管架
6. 抽水器（可選）
7. 渦旋混勻器
8. 吸紙（可選）
尿樣檢測時使用的材料：
1. 隨時可用的玻璃試管（12×75mm）和試管帽
2. 二氯甲烷（二氯甲；美國化學學會分析試劑等級）
3. bin壺
4. 100μl 、200μl 吸管
5. 通風櫥或通風良好的工作區
6. 蒸發二氯甲烷，其意義在于產生一股干燥的空氣或氮氣是提取物緩緩升溫
至37℃
尿樣提取過程
該過程包括監測二氯甲烷抽取效率的方法。在INCSTAR 實驗室里，典型
的尿樣中回收皮質醇為99±14%
1. 在壺里放一個適當的二氯甲烷容器使之冷卻，每管許可放1ml。壺應
足夠大以容納二氯甲烷的燒杯和提取血樣試管的架子
2. 為檢測提取效率，用病人的標簽給每個試管做標記，一管標上“S”（樣本），
另一管標上“E”（提取效率）
3. 分別向“S”管和“E”管加入200μL 24 小時尿樣
4. 只向”E”管加10μl 濃度為60μg /ml 24 皮質醇血清標準CA-2372，震蕩
試管架，混勻試劑或每管單獨混勻。
5. 向各個“S”管和“E”管加上1ml 冷卻的二氯甲烷，充分渦旋混勻，提
取皮質醇到有機層，蓋上帽或放在壺里以避免二氯甲烷過渡蒸發，為更
好的用吸管轉移乙氯甲烷，在轉移前，用冷的二氯甲烷清洗試管3~4 次
6. 等待分離的這段時間里，給每個“S”管和“E”管標記好兩個皮質醇包
被管.
7. 分離階段后，仔細小心的從每管有機層（二氯甲烷）底部吸取100μl 并
加到標記好的包被管中，吸取樣本前，用冷的二氯甲烷沖洗吸管頭，將吸
管頭樣本的滲出量減到zui小，轉移100μl 提取液時，不要試圖擦拭吸管
頭，否則會因二氯甲烷的特性會引起吸管頭部溶液產生氣泡
小心的向包被管轉移提取液，用一只手抓住包被管和提取管，快速小心的
吸取100μl 至包被管的底部
8. 伴隨著一股干燥的空氣和氮氣，二氯甲烷從包被管底部蒸發，提取物緩緩
升溫至37℃
警告：工作區避免過多霧狀鹵化烴產生
提取只能在通風處或通風良好的工作區進行
9. 二氯甲烷蒸發后，向每個帶病人樣本的包被管（“S”管和“E”）加入
10μl 皮質醇血清空白，CA-2367,以使每個樣本都包括適當水平的蛋白質
10. 有檢測過程的*步繼續放免操作
檢測過程：
包括繪制標準曲線，從曲線上可查得未知樣本皮質醇的含量
1. 將所有試劑恢復到室溫，使用前充分混勻.，不可有氣泡產生
2. 將標記好的包被管按如下所述安置?？偣埽═1,T2）和B0 管（1，2）對
于確鑿的數據變化和質控程序是必需的，但如果在半對數繪圖紙上作標
準曲線，二則是可省略的
3. 加樣至包被管底部
a. 10μl 皮質醇血清空白，或每個血清皮質醇標準
b. 加10μl 樣本（血清、血漿和非提取尿樣），仔細小心的吸取標準
樣本。
c. 對于提取尿樣，使用包被管，管中含有經過9 步尿提取操作而得的
提取尿
注：若要求稀釋病人血清或血漿樣本，藥盒提供的皮質醇血清空白
可作稀釋劑，提取和非提取尿樣可用蒸餾水稀釋，對于尿游離
皮質醇吸取200μl 稀釋尿樣（尿提取過程步驟3），常規檢測
繼續進行，計算結果應將稀釋因素考慮進去。
4. 每管加入1.0ml 標記-緩沖混合液，低速渦旋混勻。
5. 水浴鍋中37±2℃溫育45 分鐘。
6. 除總管外，吸出或傾析所有試管
若用抽吸技術，一定要將吸管的塑料頭接觸到包被管底部將液吸出
若用傾析技術，允許將試管傾倒3~5 分鐘排液，試管向上前在試紙上輕
呵試管，移出粘附液體。
7. 所有管在γ-計數儀上計數1 分鐘（注意測的是125I ）
8. 計算、提交結果
插圖略
標準：
本藥盒中的皮脂醇標準都對照美國提及的皮脂醇標準進行了校
準。其他產品和過程都是以該標準作對照。
質控
每個實驗室都應采用不同濃度的質控監控檢測進行。質控品應按未知
樣本來對待，保持質控記錄。哥哥實驗室都應確定自己的質控。
結果
未知血清、血漿和未知尿樣可同時檢測，用內插法從標準曲線上查出
結果，標準曲線由皮脂醇標準品繪制。非提取尿皮脂醇樣本（UC）和提取尿
游離皮質醇樣本（UFC）在用公式換算到“μg /24hr”
1. 記錄各管的每分鐘計數（CPM）
2. 皮質醇標準品計數為縱坐標，以相對應的皮脂醇濃度為橫坐標，在半
對數繪圖紙上制圖
3. 畫出標準曲線，例子見表1 和圖1
4. 確定每個樣品各管計數在縱坐標上的位置，畫一條水平橫線與標準曲
線相交，在這個交點，讀出相對應的橫坐標上的皮脂醇濃度。（μg /dl）
非提取尿皮脂醇：
將非提取尿樣的皮脂醇濃度（UC）從μg /dl 換算到μg /24hr，使用如下公
式：
S×V
UC= ———
100
S：非提取尿樣濃度（μg /dl）
V：總尿容量（ml/24hr）
100：換算因子
提取尿游離皮質醇：
將UFC 從μg /dl 換算到μg /24hr，使用如下公式：
S×V
UFC= —————
33.3(E-S)
S：提取尿樣濃度（μg /dl）
E：符合樣效率管的濃度（μg /dl）
V：總尿容量（ml/24hr）
33.3：結合了稀釋和提取因素的換算因子
對于每個實驗室來說，都希望監控尿提取過程（EE）的效率，按下面公
式計算出效率的百分比
E-S
EE= ———×100
6.0
S：提取尿樣濃度（μg /dl）
E：符合樣效率管的濃度（μg /dl）
6.0：“S”管和“E”管濃度間的預期差值
100：換算因子
單位
把血清標準品、質控和病人樣本（血清和血漿）值乘以27.59（見表1 所列
皮質醇標準的兩種單位值），使用362.5 道爾頓分子量，從μg /dl 換算到單
位nmol/ml。同樣，提取和非提取尿質控和病人值乘以2.76，將μg /24hr 換算到
單位nmol/24hr .
過程的局限性
過程中
標記-緩沖混合液必須避光保存。包被管又接收至使用前應2~7℃保存，保存未
用管時應將塑料包裝安全的封閉好，以防止冷凝現象。
溫育條件應按照程序檢查，水域鍋溫度必須保持在37±2℃，而且水面要高于試
管內溶液，但不可淹沒試管。
操作者應注意到錯誤結果可能由不正確貯藏和處理樣本所致，避免使用溶血、脂
血和黃疸性血樣。
未能獲得正確的質控皮質醇濃度意味著操作不、處理不當或試劑變質。每次
檢測都要作質控，每次檢測都要繪制標準曲線。
本藥盒不能用于測定正在用氫化潑尼松治療的病人的血清（參見闡述）
闡述
總的來說，皮質醇水平上午5~10 點zui高，下午8 點至凌晨4 點zui低。上午水平
通常是下午水平的1/2 或1/3。女性一天中皮質醇水平的變化，攝入食物時升高
而喪失食物時顯著減少，這一點已有所描述。晝夜變化，刺激和抑制試驗、各種
壓力都會使皮質醇濃度發生變化，例如：甲狀旁腺激素刺激會使皮質醇濃度升至
上午水平的2~3 倍。甲毗酮或地塞米松抑制會使上午水平不超過5μg /dl。雌激
素作為口服孕藥會引起血漿或血清蛋白中皮質醇水平升高。因此，每個病人的
皮質醇值以他/她上午皮質醇水平為準。
正常參數值
血漿或血清水平
早晨：7~25μg /dl 獲70~250ng/ml (193~690nmol/ml)
晚上：2~9μg /dl 獲20~90ng/ml (55~248nmol/ml)
在每個實驗室確立自己的正常范圍前，這些范圍作指導用。
非提取尿皮質醇：
非提取尿樣的尿皮質醇的正常范圍為75~270 μg /24hr（207~745nmol/24hr）。尿
樣收集不當可導致錯誤的病人結果，建議測定肌酸酐以鑒別尿樣收集是否合適。
提取尿樣游離皮質醇
尿游離皮質醇的正常范圍為20~80μg /24hr 皮質醇（55~248nmol/24hr）。尿樣收
集不當可導致錯誤的病人結果，建議測定肌酸酐以鑒別尿樣收集是否合適。
靈敏度：zui低可測濃度為0.21μg /dl
親和力：皮質醇抗血清的親和常數近似為2×108 liter/mol
特異性：如下化合物使用皮質醇放射免疫法測定其交叉反應，是皮質醇濃度恰
為抑制50%時，比較各類混合物的交叉反應。
化合物%交叉反應
皮質醇100
潑尼松77
6-甲強的松龍43
11-脫氧皮質醇6.3
17-烴孕酮1.2
皮質酮<0.4
地塞米松0.2
氫化潑尼松0.2
脫氫皮質酮0.1
四氫皮質酮0.1
醛固酮<0.1
可的松<0.1
雙氫皮質酮<0.1
孕酮<0.1
四氫皮質酮<0.1
6-β-皮質醇<0.1
