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丙酮酸激酶(PK)試劑盒的檢測(cè)原理和試劑組成

更新時(shí)間:2015-06-30   點(diǎn)擊次數(shù):1165次

上海信帆生物科技有限公司代理銷售“丙酮酸激酶(PK)試劑盒",現(xiàn)貨供應(yīng),歡迎!
丙酮酸激酶(Pyruvatekinase,PK)試劑盒
一、 測(cè)定意義
丙酮酸激酶酶催化糖酵解過程中的zui后一步反應(yīng),是糖酵解過程中的主要限速酶之一,也是動(dòng)植物組織中產(chǎn)生ATP的關(guān)鍵酶之一,因此測(cè)定動(dòng)植物組織中PK的活性具有重要意義。
二、 測(cè)定原理
在二磷酸腺昔(ADP)存在的條件下丙酮酸激酶能夠催化磷酸烯醇丙酮酸(PEP)轉(zhuǎn)化成丙酮酸,丙酮酸與2, 4 -二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,后者在堿性溶液中顯棕 紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比,由此計(jì)算丙酮酸激酶活力。三、試驗(yàn)中所需的儀器和設(shè)備 可見分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀、37℃恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿或酶標(biāo)板、蒸餾水
四、試劑的組成和配制
試劑一:粉劑×1瓶,常溫保存,用時(shí)加入50mL雙蒸水溶解,4℃保存3個(gè)月;試劑二:液體13 mL×1瓶,4℃保存3個(gè)月; 試劑三:粉劑×1支,常溫保存;用時(shí)加1mL雙蒸水充分溶解;試劑四:粉劑×1支,-20℃保存;用時(shí)加1.2 mL雙蒸水充分溶解;試劑五:粉劑×1支,-20℃保存;用時(shí)加550μL雙蒸水充分溶解;試劑六:2 mmol/L標(biāo)準(zhǔn)液母液1mL,-20℃保存1個(gè)月;試劑七:儲(chǔ)備液15 mL,4℃避光保存3個(gè)月; 試劑八:終止試劑50 mL,4℃保存3 個(gè)月;
五、粗酶液的提取
準(zhǔn)確稱取組織重量,按重量體積比(g/mL)加9 倍試劑一,制成10%勻漿。8000g/min 離心10 min,取上清液待測(cè),同時(shí)測(cè)定組織蛋白含量。

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