上海信帆報道:冰凍切片
更新時間:2015-05-06 點擊次數(shù):1109次上海信帆生物代理銷售 冰凍切片,現(xiàn)貨供應(yīng),歡迎
簡介編輯
冰凍切片(frozen section)是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度,然后進行切片的方法。因其制作過程較石蠟切片快捷、簡便,而多應(yīng)用于手術(shù)中的快速病理診斷。冰凍切片的種類較多,有低溫恒冷箱冰凍切片法,二氧化碳冰凍切片法,甲醇循環(huán)制冷冰凍切片法等。這些方法,隨著時代的變遷,科技的發(fā)展,許多年前被認為是非常重要的技術(shù),現(xiàn)在也逐步被淘汰了。當然有些技術(shù),如低溫恒冷箱冰凍切片法,正在受到青睞。
2冰凍切片的應(yīng)用編輯
(1)在手術(shù)進行中,突然發(fā)現(xiàn)病人的病變與原診斷,原定手術(shù)方案不相符合,或者懷疑時,需要病理確定。
(2)了解淋巴結(jié)內(nèi)是否有轉(zhuǎn)移的腫瘤細胞,或者轉(zhuǎn)移的程度,以利于確定是否需要*掃除淋巴結(jié)或者其它的治療措施。
(3)對于已確定為惡性腫瘤的患者,則需要了解其手術(shù)范圍是否足夠,上下切緣是否有殘存的腫瘤組織。
(4)在做剖腹探查時所發(fā)現(xiàn)的腫塊或者異樣的組織。
(5)顯示組織中的脂肪和脂類物質(zhì),這常見于某些病例如脂肪瘤及肉瘤,某些科研組織等。
(6)某些酶的顯示如ATP酶,琥珀酸脫氫酶等。
(7)神經(jīng)病理學(xué)技術(shù)中的某些染色法如:Eager氏法,Marchi氏法,Cajal氏法,Hortega氏法和Holzer氏法等。
(8)對某些物質(zhì)所進行的免疫熒光的研究。
3術(shù)中為何做冰凍切片編輯
病理檢查首先需要將切下的病變組織器官作一系列技術(shù)處理,包括固定、取材、脫水、浸蠟、包埋、切片和染色等,一般需花費24小時方可完成全部制片過程,然后由病理醫(yī)生用顯微鏡觀察,并做出診斷。這種檢查方法稱為常規(guī)石蠟切片,是病理檢查中zui常用的方法。但是,這種方法從外科醫(yī)生將病變組織切下,到做出病理診斷,前后通常需要3天的時間。有時外科醫(yī)生希望在手術(shù)過程中馬上了解病變的性質(zhì),以便及時確定手術(shù)范圍,并做出相應(yīng)的處理,就要求病理醫(yī)生在手術(shù)過程中做出病理診斷,此時就必須快速切片診斷,快速冰凍切片是目前應(yīng)用的zui廣泛的方法。
快速冰凍切片是用于手術(shù)中病理診斷的一種方法,病理醫(yī)生在收到手術(shù)標本后約l5分鐘之內(nèi)做出診斷,馬上告訴手術(shù)醫(yī)生,以便迅速作出下一步治療決策。病理診斷的正確與否直接關(guān)系到手術(shù)臺上處理患者的下一個步驟,如乳腺腫塊切除后的冰凍報告是良性的纖維腺瘤,則可宣告手術(shù)結(jié)束;如冰凍報告是乳腺癌,就需要進一步擴大手術(shù)范圍,切除整個乳房及腋窩淋巴結(jié);肢體的惡性腫瘤如骨肉瘤,通常需截肢。冰凍切片病理診斷對手術(shù)治療有重大幫助和指導(dǎo)意義,診斷要力求正確、迅速和可靠。
然而,快速冰凍切片要在如此之短的時間內(nèi)做出診斷,難度相當高,取材有局限性,制作切片的質(zhì)量也不如常規(guī)石蠟切片高。因此,冰凍切片的確診率比常規(guī)切片低,有一定的延遲診斷率和誤診率。目前,冰凍切片診斷尚不能廣泛應(yīng)用,即使選擇性應(yīng)用,事后仍需用常規(guī)石蠟切片對照和存檔。
快速冰凍切片主要用于下列幾種情況:
①確定病變是否為腫瘤;
②判斷腫瘤的良惡性;
③了解腫瘤有無播散到鄰近淋巴結(jié)或臟器;
④確定手術(shù)切緣有無腫瘤浸潤,以了解手術(shù)范圍是否足夠大;
⑤幫助識別手術(shù)中某些意外和確定可疑微小組織(如甲狀旁腺、輸卵管或輸精管等);
⑥取新鮮組織供激素受體測定、腫瘤藥敏試驗、電鏡檢查和分子生物學(xué)檢查等特殊需要。 [1]
4冰凍切片的制作方法編輯
低溫恒冷箱冷凍切片制作法
以Shandon As 620 E型恒溫箱冷凍切片機為例,該機的箱面上有電子控制板,裝有即時冷凍鍵和除霜鍵,啟動即時冷凍鍵,機器馬上進行工作狀態(tài),并可持續(xù)10mins。啟動即時除霜鍵,可將工作間頂部后面的制冷柵上的霜除掉,并可持續(xù)15mins。有照明鍵一個,啟動該鍵可照明工作間,有利工作及觀察組織的冰凍狀況。配有消毒鍵一個,當進行一周的工作或者一天的工作后,啟動該鍵,可對工作間進行消毒。當每天工作完畢時,可啟動密鎖鍵,鎖住工作間。除此之外,箱面的左邊有四個按鍵,兩個為快速自動進退鍵,兩個為微小進退鍵,還有一個手動旋鈕,調(diào)節(jié)修組織塊時的進退。
冷凍箱內(nèi)左邊的冷凍臺,溫度可達-60℃左右,冷凍箱的中間為一臺切片機,工作間的溫度在0-30℃間可任意調(diào)節(jié),并在箱面上的熒屏顯示出來。
操作方法及步驟
①取材,未能固定的組織取材,不能太大太厚,厚者冰凍費時,大者難以切完整,為24×24×2mm。
②取出組織支承器,放平擺好組織,周邊滴上包埋劑,速放于冷凍臺上,冰凍。小組織的應(yīng)先取一支承器,滴上包埋劑讓其冷凍,形成一個小臺后,再放上細小組織,滴上包埋劑。
③將冷凍好的組織塊,夾緊于切片機持承器上,啟動粗進退鍵,轉(zhuǎn)動旋鈕,將組織修平。
④調(diào)好欲切的厚度,根據(jù)不同的組織而定,原則上是細胞密集的薄切,纖維多細胞稀的可稍為厚切,一般在5~10um間。
⑤調(diào)好防卷板。制作冰凍切片,關(guān)鍵在于防卷板的調(diào)節(jié)上,這就要求操作者要細心,準確地將其調(diào)較好,調(diào)校至適當?shù)奈恢谩G衅瑫r,切出的切片能在*時間順利地通過刀防卷板間的通道,平整地躺在持刀器的鐵板上。這時便可掀起防卷板,取一載玻片,將其附貼上即可。
⑥應(yīng)視不同的組織選擇不同的冷凍度。冷凍箱中冷凍度的高低,主要根據(jù)不同的組織而定,不能一概而論。如:切未經(jīng)固定的腦組織,肝組織和淋巴結(jié)時,冷凍箱中的溫度不能調(diào)太低,在-10- -15℃左右,切、脾、腎、肌肉等組織時,可調(diào)在-15~20℃左右,切帶脂肪的組織時,應(yīng)調(diào)至-25℃左右,切含大量的脂肪時,應(yīng)調(diào)至-30℃。
冰凍切片時的注意事項
①防卷板及切片刀和持刀架上的板塊應(yīng)保持干凈,需經(jīng)常用毛筆挑除切片殘余和用柔軟的紙張擦。有時需要每切完一張切片后就用紙擦一次。因為這個地方是切片通過和附貼的地方,如果有殘余的包埋劑粘于刀或板上,將會破壞甚至撕裂切片,便切片不能完整切出。
②多例多塊組織同時需做冰凍切片時,可各自放于不同的支承器上,于冷凍臺上凍起來,然后依據(jù)不同的編號,依序切片,這樣做既不費時也不會亂。
③放置組織冰凍前,應(yīng)視組織的形狀及勢來放置,所謂“砍柴看柴勢",切片也是如此,如果胡亂放置,就不能收到很好的效果。
④組織塊不須經(jīng)各種固定液固定,尤其是含水的固定液,在未達到固定前,更不能使用。快速冰凍切片,不須要預(yù)先固定,一是為了爭取時間,二是固定了的組織,反而增加了切片的難度。如果使用未*固定的組織做冰凍切片,就會出現(xiàn)冰晶。這是因為含水的固定液在組織未經(jīng)固定前,其中的水份也可滲入到組織中去,當冰凍發(fā)生時,這些水份就存留于組織中,形成了冰晶。
⑤當切片時,如果發(fā)現(xiàn)冰凍過度時,可將冰凍的組織連同支承器取出來,在室溫停留片刻,再行切片,或者用口中哈氣,或者用大拇指按壓組織塊,以此來軟化組織,再行切片。另者,調(diào)高冰凍點。
⑥用于附貼切片的載玻片,不能存放于冷凍處,于室溫存放即可。因為當附貼切片時,從室溫中取出的載玻片與冷凍箱中的切片有一種溫度差,當溫度較高的載玻片附貼上溫度較低的切片時,由于兩種物質(zhì)間溫度的差別,當它們碰撞在一起時,分子彼此間發(fā)生轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生了一種吸附力,使切片與載玻片牢固地附貼在一起。如果使用冷藏的載玻片來附貼切片,由于溫度相同,沒有發(fā)生上述的現(xiàn)象。
冰凍切片的快速染色法
冰凍切片附貼于載玻片后,立即放入恒冷箱中的固定液固定1分鐘后即可染色。以往,為了防止切片脫落,當切片附貼于載玻片后,即用電吹風吹干后再固定。根據(jù)實驗對比認為這種做法欠妥未經(jīng)固定的切片,強熱作用后,蛋白發(fā)生變性,核內(nèi)含有的物質(zhì)由于熱的作用融合在一起,染色后鏡下分辨不出核內(nèi)的各種物質(zhì)。冰凍切片附貼于載玻片后,立即放入恒冷箱中的固定液固定,這樣可以使切片中細胞內(nèi)各種物質(zhì)都在沒有任何變化的情況下被固定起來,核染色質(zhì)清晰,核仁明顯,其他物質(zhì)都完好保存。
方法:
① 切片固定30秒-1分鐘。
② 水洗。
③ 染蘇木素3-5分鐘。
④ 分化。
⑤ 于堿水中返藍20秒。
⑥ 伊紅染色10-20秒。
⑦ 脫水,透明,中性樹膠封固。
冰凍組織1-2分鐘,切片1分鐘,固定1分鐘,染色共五分鐘。總共在10分鐘內(nèi)完成快速制片過程,結(jié)果與石蠟切片不相上下。
冰凍切片的方法還有很多種,如甲醇循環(huán)的半導(dǎo)體冰凍切片法,二氧化碳冰凍切片法,半導(dǎo)體冰凍切片法和氯乙烷冰凍切片法等,這些方法在目前來說已很少使用,因此在這里不作闡述。
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