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上海信帆:大鼠P物質(zhì)(SP)操作說(shuō)明和操作步驟

點(diǎn)擊次數(shù):1202 發(fā)布時(shí)間:2015/7/20
提 供 商: 上海信帆生物科技有限公司 資料大小:
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相關(guān)產(chǎn)品:

大鼠P物質(zhì)(SP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書(shū)


使用目的:

本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清,血漿,組織及相關(guān)液體樣本中P物質(zhì)(SP)含量。 


 實(shí)驗(yàn)原理

本試應(yīng)法測(cè)標(biāo)P物質(zhì)(SP)水平化的P物質(zhì)(SP)體包中依P物質(zhì)(SP),再與 HRP 標(biāo)記的P物質(zhì)(SP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo) 抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB  HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的P物質(zhì)(SP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定度(OD 過(guò)標(biāo)準(zhǔn)計(jì)P物質(zhì)(SP)濃度。

試劑盒組成

1

30 倍濃縮洗滌液

20ml×1 

7

終止液

6ml×1 

2

酶標(biāo)試劑

6ml×1 

8

標(biāo)準(zhǔn)品(480ng/L

0.5ml×1 

3

酶標(biāo)包被板

12 孔×8 

9

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1.5ml×1 

4

樣品稀釋液

6ml×1 

10

說(shuō)明書(shū)

5

顯色劑 A 

6ml×1 

11

封板膜

6

顯色劑 B 

6ml×1/

12

密封袋

個(gè)

標(biāo)本要求

1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能 馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)提供標(biāo)準(zhǔn)戶(hù)可管中進(jìn)行稀 釋。

240ng/L

號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

120ng/L

號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl  5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

60ng/L

號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl  4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  30ng/L

號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl  3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

 15ng/L

號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl  2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液


2. 加樣設(shè)白對(duì)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)標(biāo)被板標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn) 50μl測(cè)樣 40μl, 然后測(cè) 10μl樣品zui 5 加樣標(biāo),盡 量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此

重復(fù) 5 次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同 3

8. 洗滌:操作同 5

9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

15 分鐘.

10.  終止終止 50μl,終應(yīng)時(shí)藍(lán)轉(zhuǎn)黃

11.  測(cè)定調(diào)450nm 波長(zhǎng)依測(cè)OD  測(cè)應(yīng)加終止 液后 15 分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。

計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD  值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的

OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo)

準(zhǔn)曲樣品 OD 方程計(jì)再乘數(shù), 即為樣品的實(shí)際濃度。

注意事項(xiàng)

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未 用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間 控制在 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,使用排槍加樣。

4 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本 OD  大于標(biāo)準(zhǔn) OD 請(qǐng)釋液稀釋數(shù)測(cè)定計(jì) 算時(shí)請(qǐng)zui數(shù)×5

5 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請(qǐng)避光保存。

7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

保存條件及有效期

12-8

2.有效期:6 個(gè)月

上海信帆代理銷(xiāo)售大鼠P物質(zhì)檢測(cè)試劑盒,現(xiàn)貨供應(yīng)。試劑盒靈敏度高,提供技術(shù)指導(dǎo),咨詢(xún)。

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