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大鼠白細胞介素-6(IL-6)ELISA試劑盒操作說明書下載

點擊次數:1187 發布時間:2015/6/30
提 供 商: 上海信帆生物科技有限公司 資料大小:
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上海信帆生物科技有限公司 大鼠系列試劑盒說明書
大鼠白細胞介素-6(IL-6)酶聯免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍: 48T
3pg/ml-120pg/ml
使用目的:
本試劑盒用于測定大鼠血清樣本中白細胞介素-6(IL-6)含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠白細胞介素-6(IL-6)水平。用純化的大鼠
白細胞介素-6(IL-6)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白細
胞介素-6(IL-6),再與 HRP 標記的白細胞介素-6(IL-6)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗
體復合物,經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在
酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素-6(IL-6)呈正相關。用
酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中大鼠白細胞介素-6
(IL-6)濃度。
試劑盒組成
1 20 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 3ml×1 瓶
2 酶標試劑 3ml×1 瓶 8 標準品(240pg/ml) 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板 12 孔×4 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 3ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑 A 液 3ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑 B 液 3ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
120pg/ml 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液
60pg/ml 4 號標準品 150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
30pg/ml 3 號標準品 150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
15pg/ml 2 號標準品 150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
7.5pg/ml 1 號標準品 150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、


大鼠白細胞介素-6(IL-6)ELISA試劑盒操作說明書下載


上海信帆生物科技有限公司 大鼠系列試劑盒說明書
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,
然后再加待測樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液:將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復 5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同 3。
8. 洗滌:操作同 5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
10 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止
液后 15 分鐘以內進行。
操作程序總結:
計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與 OD 值計算出標
上海信帆生物科技有限公司 大鼠系列試劑盒說明書
準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,
即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未
用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在 5 分鐘內,如標本數量多,使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD 值
大于標準品孔*孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
保存條件及有效期 1.試劑盒保存:;
2-8℃。
2.有效期:6 個月

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