總抗氧化能力(Total antioxidant capacity ,T-AOC) 試劑盒說明書 總抗氧化能力(Total antioxidant capacity ,T-AOC) 試劑盒說明書 可見分光光度法 注意:正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。 可見分光光度法 注意:正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。 測定意義 測定對象中各種抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構(gòu)成總抗氧化水平。在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和藥學(xué)研究 中常常檢測血漿、血清、唾液、尿液等各種體液,細胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液 及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。 測定原理 在酸性環(huán)境下,物質(zhì)還原 Fe 3+ -三吡啶三吖嗪(Fe 3+ -TPTZ)產(chǎn)生藍色的 Fe 2+ -TPTZ 的能力反映 了其總抗氧化能力。 自備實驗用品 可見分光光度計、恒溫水浴鍋、低溫離心機、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。 試劑組成和配制 提取液:液體 60mL×1 瓶,使用前預(yù)冷。 試劑一:液體 50mL×1 瓶,避光保存。 試劑二:液體 5mL×1 瓶,4℃避光保存。 試劑三:液體 5mL×1 瓶,避光保存。 樣品的制備 (1) 血清、血漿、唾液或尿液樣品 血漿(制備時可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝,不宜使用 EDTA 抗凝)4℃,5000rpm 離心 10min,取上清待測。血清、唾液或尿液樣品直接用于測定,也可以-80℃凍存(不宜超 30 d) 后再測定。 (2) 組織樣品 按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液)進行冰浴勻漿,然后 10000g,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 (3) 細胞樣品 按照細胞數(shù)量(10 4 個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細胞 加入 1mL 提取液),冰浴超聲波破碎(功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);10000g, 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 操作步驟 混合液(現(xiàn)配現(xiàn)用):將試劑一、試劑二、試劑三按 10:1:1 的比例混合,使用前預(yù)溫至 37℃ 。 空白管 測定管 混合液(μL) 900 900 樣品(μL) 30 雙蒸水(μL) 120 90 充分混勻,反應(yīng) 10min,雙蒸水調(diào)零,1mL 玻璃比色皿,測定 593nm 處吸光值,△A= A 測定 -A 空白 |