- 簡(jiǎn)介:
- (matrix metalloproteinase, MMP)以無(wú)活性的酶原形式分泌,活化后能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)的膠原蛋白,又稱膠原酶。通過(guò)影響細(xì)胞外基質(zhì),膠原酶參與胚胎發(fā)育、形態(tài)發(fā)生、組織重塑等過(guò)程,并參與炎癥、腫瘤、、神經(jīng)等許多疾病過(guò)程。血漿與組織中的MMP-2、MMP-9參與各種生理與病理過(guò)程,其在診斷和治療中的意義日益受到重視。
- 檢測(cè)原理:
- (Zymography)檢測(cè)MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一種廣為使用的、基于SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測(cè)方法,其靈敏度可達(dá)1 nM,高于ELISA方法,其基本原理和程序是:制備加有膠原酶底物的SDS-PAGE 凝膠,含蛋白酶的樣品在此凝膠中進(jìn)行電泳,電泳結(jié)束后取出凝膠與酶反應(yīng)Buffer 孵育,凝膠染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深染,形成深色背景,但在有蛋白酶條帶的位置,蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白,因而不被染色而形成透亮區(qū)域,從而能同時(shí)指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。本試劑盒提供MMP-2、MMP-9 特異蛋白底物及酶學(xué)反應(yīng)緩沖液,可檢測(cè)少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶譜及活性,檢測(cè)靈敏度~1nM。試劑盒可進(jìn)行50次標(biāo)準(zhǔn)小膠檢測(cè),如果小膠加樣孔為10~15個(gè),則總計(jì)可檢測(cè)500~750個(gè)樣品。
- 檢測(cè)目的:
- 測(cè)MMP-2、MMP-9 酶譜及活性(Detect MMP2 and MMP9 as low as 1nM)。
4. 試劑盒組成與儲(chǔ)存: A. 2 × SDS-PAGE non-reducing buffer 1.5 ml , −20 ºC; B. 10 × Substrate G, 50 ml, −20 ºC; C. 10 × Buffer A, 50 ml, 4 ºC, 使用時(shí)用蒸餾水稀釋; D. 10 × Buffer B, 50 ml, 4 ºC, 使用時(shí)用蒸餾水稀釋; E. SDS-PAGE 凝膠蛋白質(zhì)考馬斯亮藍(lán)染色液, 4 ºC。 |