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信帆生物為您提供:人前列腺素E2試劑盒的操作原理及樣本處理方法

更新時間:2018-05-14   點擊次數:1279次

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前列腺素的生理作用
(1)對生殖系統作用:作用于下丘腦的黃體生成素釋放激素的神經內分泌細胞,增加黃體生成素釋放激素的釋放,再刺激垂體前葉黃體生成素和卵泡刺激素分泌,從而使激素分泌增加。前列腺素也能直接刺激間質細胞分泌。可增加大鼠重量、核糖核酸含量、透明質酸酶活性和精數量,增加精活動。前列腺素維持雄性生殖器官平滑肌收縮,被認為與精作用有關。精中PG使子宮頸肌松弛,促進精在雌性動物生殖道中運行,有利于受精。但大量前列腺素,對雄性生殖機能卻有抑制作用。
(2)對血管和支氣管平滑肌的作用:不同的前列腺素對血管平滑肌和支氣管平滑肌的作用效應不同。前列腺素E和前列腺素F能使血管平滑肌松弛,從而減少血流的外周阻力,降低血壓。
(3)對胃腸道的作用:可引起平滑肌收縮,抑制胃酸分泌,防止強酸、強堿、*等對胃粘膜侵蝕,具有細胞保護作用。對小腸、結腸、胰腺等也具保護作用。還可刺激腸液分泌、肝膽汁分泌,以及膽囊肌收縮等。
(4)對神經系統作用:前列腺素廣泛分布于神經系統,對神經傳遞質的釋放和活動起調節作用,也有人認為,前列腺素本身即有神經傳遞質作用。
(5)對呼吸系統作用:前列腺素E2和I2有松弛支氣管平滑肌作用,而前列腺素F2α則相反,是支氣管收縮劑。
(6)對內分泌系統的作用:通過影響內分泌細胞內環腺苷酸(CAMP)高低水平,來影響激素的合成與釋放。如促使素分泌和腎上腺皮質激素的合成。也通過降低靶器官的CAMP水平,而使激素作用降低。

信帆生物為您提供:人前列腺素E2試劑盒的操作原理及樣本處理方法!操作原理:

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人前列腺素E2(PGE2)水平。用純化的人前列腺素E2(PGE2)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中 依次加入前列腺素E2(PGE2),再與 HRP 標記的前列腺素E2(PGE2)抗 體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的前列腺素E2(PGE2)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標 準曲線計算樣品中人前列腺素E2(PGE2)濃度。

試劑盒樣本處理方法:

在收集樣本前都必須有一個完整的計劃,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天就進行檢測的樣本,及時儲存在4℃備用。對于隔天再檢測的樣本,及時分裝后凍存在-20℃備用,有條件的,好-70℃凍存備用。標本應避免反復凍融。

液體類標本包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。

血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。
血漿:應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
培養細胞:檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑,用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

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