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原來保溫在ELISA實(shí)驗(yàn)操作中如此重要

更新時(shí)間:2017-02-23   點(diǎn)擊次數(shù):1745次

原來保溫在ELISA實(shí)驗(yàn)操作中如此重要!

在 ELISA 中一般有兩次抗原抗體反應(yīng),即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后。抗原抗體反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間,這一保溫過程稱為溫育(incubation) ,有人稱之為孵育,在ELISA 中似不恰當(dāng)。

ELISA 屬固相免疫測定,抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標(biāo)本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機(jī)會(huì),只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個(gè)逐步平衡的過程,因此需經(jīng)擴(kuò)散才能達(dá)到反應(yīng)的終點(diǎn)。

原來保溫在ELISA實(shí)驗(yàn)操作中如此重要

在其后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。這就是為什么ELISA 反應(yīng)總是需要一定時(shí)間的溫育。溫育常采用的溫度有 43℃、37℃、室溫和4℃(冰箱溫度)等。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度,也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。在建立ELI SA 方法作反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究時(shí),實(shí)驗(yàn)表明,兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2 小時(shí),產(chǎn)物的生成可達(dá)。為加速反應(yīng),可提高反應(yīng)的溫度,有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行,但不宜采用更高的溫度。抗原抗體反應(yīng)4℃更為*,在放射免疫測定中多使反應(yīng)在冰箱中過夜,以形

成zui多的沉淀。但因所需時(shí)間太長,在ELISA 中一般不予采用。

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