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免疫熒光-標本如何保存

更新時間:2016-08-09   點擊次數:10685次

免疫熒光-標本如何保存,信帆生物為您答疑解惑!

一:標本的處理

 

. 涂片和印片   血液、細菌培養物、腦脊液、體腔滲出液和細胞懸液等均可簡單地涂抹在玻片上,干燥固定后就可用于熒光抗體染色。腦脊液、臟器(肝、脾、淋巴結等)、細菌菌落或尸體病變組織可把切面壓印于玻片上作成印片,經固定后再染色。

 

. 組織切片   這是組織學和細胞學zui常用的顯微鏡標本片。主要有以下兩種:①冷凍切片:為了使抗原zui大量的保存,的制片方法是冷凍切片,其優點是操作簡單,組織的抗原性保存好,自發熒光較少,特異熒光強,同時適用于不穩定的抗原,缺點是組織結構欠清晰。②石蠟切片:石蠟切片是研究形態學的主要制片方法,它不但是觀察組織結構的理想方法,而且可進行回顧性研究。其優點是組織細胞的精細結構顯現清楚,但對抗原的保存量不如冷凍切片,并有組織自發熒光和非特異性熒光,需加酶消化處理。

 

. 細胞培養標本   用HEP-2細胞或Hela細胞培養,待細胞在玻片上形成單層,固定后用作抗核抗體等檢測的抗原片。還可使細胞單層生長在玻片上,再用病毒或病人標本感染,然后固定,用熒光抗體染色法檢測病毒。

 

. 活細胞染色    檢查淋巴細胞表面抗原以及免疫球蛋白受體、癌細胞表面抗原、血清中抗癌細胞抗體等,均可用活細胞熒光抗體染色法。當同時觀察細胞表面兩種抗原的分布和相互關系時,可用雙標記法進行染色。

 

二:標本的固定

 

標本固定的作用不僅使細胞內蛋白質凝固,終止細胞內酶反應過程,防止細胞自溶,以保持細胞固有形態和結構,更重要的作用是保存組織細胞的抗原性,防止標本從玻片上脫落,除去妨礙抗體結合的類脂,易于保存。固定標本的原則應不損傷細胞的形態、細胞內的抗原和細胞膜的通透性。

 

蛋白質類抗原如血清蛋白質和抗體,可用乙醇或甲醇固定;微生物抗原可用丙酮或三氯化碳固定;如需除去病毒的蛋白質外殼,則可使用胰蛋白酶;多糖類抗原用10% 福而馬林固定或以微火加熱固定。如有粘液物質存在,應用透明質酸酶等處理除去。類脂質豐富的組織進行蛋白、多糖抗原檢測時,需用有機溶劑(乙醚、丙酮等)處理除去類脂。

 

三:標本的保存

 

標本在固定干燥后,立即進行熒光抗體染色及鏡檢。如必須保存時,則應保持干燥,置4℃以下保存。一般細菌涂片或器官組織切片經固定后可保存一個月以上。但病毒和某些組織抗原標本抗原性喪失很快,數天后就失去其抗原性,需在-20℃以下保存。

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