上海信帆生物：人血漿中緩激肽的SPE LC-MS定量檢測
更新時(shí)間：2016-04-20 點(diǎn)擊次數(shù)：927次緩激肽是一種含有9種氨基酸的生理和藥理活性肽，由蛋白質(zhì)的激肽基團(tuán)衍生而來。激肽是可以促使血管舒張、血管通透性增強(qiáng)、一氧化氮釋放和花生四烯酸流動的效應(yīng)因子。它是血壓、腎功能和心臟功能的重要調(diào)節(jié)因子，還參與炎癥反應(yīng)。緩激肽可引起血管擴(kuò)張，從而導(dǎo)致血壓降低。
因此，對這種激素肽的變化進(jìn)行高靈敏度、高選擇性和高準(zhǔn)確度地定量，并將其作為疾病進(jìn)展或藥物治療的評估指標(biāo)，將會極為有利。盡管以往都是通過配體結(jié)合試驗(yàn)(LBAs)對生物制劑進(jìn)行定量分析，但在過去幾年中利用LC-MS/MS分析大分子已成為一種趨勢。這在某種程度上是因?yàn)長BAs產(chǎn)生顯著的交叉反應(yīng)問題并且缺乏標(biāo)準(zhǔn)化。
LC-MS/MS具有多種優(yōu)勢，例如開發(fā)時(shí)間更短、準(zhǔn)確度和精度更高、可重復(fù)進(jìn)樣，并且容易區(qū)分相似度很高的類似物、代謝物或內(nèi)源性干擾物。常見的肽通常難以通過LC-MS/MS進(jìn)行分析，這是因?yàn)槠洳灰纂x子化以及不易產(chǎn)生理想的碎片離子而導(dǎo)致MS靈敏度較低，從而使得LC和樣品制備方法開發(fā)非常困難。由于緩激肽在血漿中的濃度低至pg/mL水平且代謝速度快，在采血和樣品制備過程中還可通過蛋白水解人為生成，因此對其進(jìn)行準(zhǔn)確定量相當(dāng)困難。
本研究采用了專門設(shè)計(jì)的血液收集技術(shù)以防止體外緩激肽的形成，并且利用混合型固相萃取(SPE)和實(shí)心核顆粒色譜柱，zui大限度降低并消除基質(zhì)干擾的同時(shí)提高定量分析的靈敏度。
應(yīng)用優(yōu)勢
■ 使用CORT ECS™ UPLC®色譜柱有利于獲得較窄的峰寬、改善靈敏度和分離度，并消除基質(zhì)干擾
■ 采用Oasis®WCX(一種混合型吸附劑)的SPE方法降低了基質(zhì)干擾并提高了血漿中緩激肽提取的選擇性
■ Oasis μElution96孔板可濃縮樣品，并在zui大程度上減少肽損失，使血漿中緩激肽的檢測限達(dá)到5 pg/mL
■ 選擇性高的快速SPE提取(<30 分鐘)省去了耗時(shí)的免疫親和純化步驟
■ Xevo®TQ-S MS可實(shí)現(xiàn)與免疫檢測方法相匹配的高靈敏度，但與后者相比更加省時(shí)省力
■ 與傳統(tǒng)LBA方法相比更為準(zhǔn)確精密
■ 分析速度快，只需3.5分鐘，大大提高了工作效率
沃特世解決方案
ACQUITY UPLC®系統(tǒng)
Xevo TQ-S質(zhì)譜儀
CORTECS UPLC C18色譜柱
Oasis WCX 96孔µElution提取板
ACQUITY®96孔收集板
詳細(xì)內(nèi)容：人血漿中緩激肽的SPE LC-MS/MS定量檢測方法開發(fā)
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