葡聚糖凝膠G系列使用說明-上海信帆生物
更新時間：2022-09-08 點(diǎn)擊次數(shù)：1573次葡聚糖凝膠G系列使用說明-上海信帆生物
上海信帆生物供應(yīng)葡聚糖凝膠G系列產(chǎn)品，備有大量庫存現(xiàn)貨，質(zhì)量穩(wěn)定。
此說明僅限參考
葡聚糖凝膠G 系列使用說明
1 化學(xué)和物理性質(zhì)
葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠，含有大量的羥基，很容易在水中和電解質(zhì)溶液中溶脹。親水基質(zhì)使其
非特異性吸附最小化，并在生物分子分離期間得到較高的回收率。G 型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯(lián)度，
因此它們的溶脹度和分級分離范圍也有所不同。葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影
響。
2 產(chǎn)品說明
產(chǎn)品名稱球蛋白分離范圍應(yīng)用最大耐壓MPa
葡聚糖凝膠G-10<700 緩沖液交換、脫鹽，分離小分子，去除小分子0.15
葡聚糖凝膠G-15<1500 緩沖液交換、脫鹽，分離小分子，去除小分子0.15
葡聚糖凝膠G-25 1000-5000 工業(yè)上脫鹽及交換緩沖液0.15
葡聚糖凝膠G-50 1000-30000 多肽分離、脫鹽、清洗生物提取液、分子量測定0.10
葡聚糖凝膠G-75 2000-70000 蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數(shù)測定0.016
葡聚糖凝膠G-100 2000-120000 蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數(shù)測定0.0096
葡聚糖凝膠G-150 5000-300000 蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數(shù)測定0.0096
葡聚糖凝膠G-200 5000-600000 蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數(shù)測定0.0096
3 使用方法
Sephadex 系列產(chǎn)品以干粉形式存在，使用前必須溶脹，在膨脹期間應(yīng)避免過度攪拌，因?yàn)樗赡芷?/p>
壞填料，不要使用磁力攪拌器。
3.1 填料的準(zhǔn)備
（1）將填料在過量去離子水或緩沖液中，室溫條件下膨脹24 小時，或用熱水膨脹1 小時（不要水浴！）。
洗脫緩沖液不應(yīng)含有高粘度的試劑。溶脹過程中，如果上層有漂浮物，請去除。
（2）將溶脹好的填料，所有的緩沖液等材料平衡至實(shí)驗(yàn)操作溫度，對所有的緩沖液進(jìn)行脫氣處理。
3.2 裝柱
（1）檢查層析柱所有部件，特別是過濾網(wǎng)，密封圈，螺旋塞是否緊密，玻璃管是否干凈和完整。
（2）將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位，務(wù)必使底端無氣泡。
（3）用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠
在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。
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（4）打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的1.33 倍的流速流過，使柱床穩(wěn)定（注意壓力不要超過填
料最大耐壓）。
3.3 平衡
上樣前平衡層析柱至少5-10 個柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止（流出液的pH 值和電導(dǎo)值等于
上柱的Buffer 的pH 值和電導(dǎo)值）。
3.4 上樣
樣品一定要離心或過濾后（0.45um 濾膜）上樣。
凝膠過濾的上樣量一般為不大于5%的柱床體積，我們建議初次上樣控制在1-2%的柱床體積，視分
離情況可以調(diào)整；脫鹽時上樣量可以達(dá)到20%的柱床體積，柱高的選擇也與分離要求相關(guān)，柱子越高，分
離效果相應(yīng)越好，但是，柱高過高的凝膠柱會引起的反壓，也應(yīng)當(dāng)盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定
柱高和流速控制，脫鹽時高徑比為5：1 即可。
3.5 洗脫方法
可以用無鹽水，也可以采用上柱時的緩沖液洗脫。
3.8 在位清洗（CIP）
凝膠使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是用0.1 M 氫氧化
鈉洗2 個柱體積，再以至少10 個柱體積平衡緩沖液再生。
4 保存
未處理的填料，室溫密閉保存。使用完的填料，用純水將鹽分*沖洗，最后保存在20%乙醇中，4℃
保存。
5 注意事項(xiàng)：
（1）上樣之前，樣品必須經(jīng)過膜過濾及去除色素，否則雜質(zhì)及色素會被吸附到填料上，影響填料的
正常使用。所有的緩沖液均需要用0.45um 的過濾器過濾。
（2）在使用過程中，避免使用高濃度的強(qiáng)酸強(qiáng)堿，酸和堿的濃度應(yīng)低于0.1 摩爾。堿會使流速變慢。
（3）不同的樣品，吸附和洗脫方法不相同，可以根據(jù)相關(guān)的文獻(xiàn)進(jìn)行。
6 不同規(guī)格特性
細(xì)顆粒：流速慢，分離效果優(yōu)。
粗顆粒：流速快，分離效果偏差。
中顆粒：流速適中，分離效果適中，一般客戶最常選用此型號。
葡聚糖凝膠G系列
